[發(fā)明專利]柑橘潰瘍病菌RPA檢測的特異引物、試劑盒和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010772043.7
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111690759B
• 公開（公告）日: 2023-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋震;周常勇;馬志敏;段玉;許建建;賓羽
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/64
• 代理公司: 重慶雙馬智翔專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50241
• 代理人: 方洪

1.一種柑橘潰瘍病菌RPA檢測的特異引物，其特征在于，所述特異引物的核苷酸序列為：

上游引物：5’-GTTGGTGTCGTCGCTTGTATGGACTATAGT-3’，

下游引物：5’-GCCGCGCACGGGTGCAAAAAATCTTCAACTTC-3’。

2.一種柑橘潰瘍病菌RPA檢測試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的特異引物。

3.如權(quán)利要求2所述的柑橘潰瘍病菌RPA檢測試劑盒，其特征在于，還含有植物總核酸提取試劑盒、RPA擴增反應(yīng)試劑、陰性對照、陽性對照。

4.一種柑橘潰瘍病菌RPA檢測的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)提取待測樣品基因組DNA；

2)利用提取的樣品基因組DNA進行RPA反應(yīng)，所用特異引物為權(quán)利要求1中所述的特異引物；

3)RPA反應(yīng)完成后對反應(yīng)產(chǎn)物進行檢測，檢測到目標擴增對象的即為陽性樣品。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，RPA反應(yīng)的反應(yīng)體系包含：在反應(yīng)體系中的終濃度為0.2～0.5μmol·L^-1的上\下游引物，樣品基因組DNA，RPA擴增反應(yīng)試劑。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述上\下游引物在反應(yīng)體系中的終濃度為0.4μmol·L^-1。

7.如權(quán)利要求4至6任一項所述的方法，其特征在于，RPA反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度為37～42℃，反應(yīng)時間為10～50分鐘。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，RPA反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度為39℃，反應(yīng)時間為30分鐘。

9.如權(quán)利要求4至8任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中RPA反應(yīng)完成后對反應(yīng)產(chǎn)物進行檢測，檢測方法為將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳分析或者核酸測序。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，進行瓊脂糖凝膠電泳分析時，檢測到231或232bp的條帶即表明待測樣品是陽性樣品。