[發明專利]一種類哮喘慢阻肺重疊氣道炎癥小鼠模型的建立方法及其應用

有效

• 申請號: 202010771733.0
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111820188B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 曾智敏;郭禹標;黃鑫炎;曾宇瑩;陳鳳佳;譚衛平
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第一醫院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

本發明公開了一種類哮喘慢阻肺重疊氣道炎癥小鼠模型的建立方法及其應用。其通過如下任一種方式構建得到：S1、吸煙和曲霉菌蛋白酶誘導的類ACO模型：小鼠從第0天起每天吸入香煙的煙霧進行吸煙處理；吸煙處理結束3～7天后，鼻內滴入曲霉菌蛋白酶溶液致敏小鼠，構建得到類ACO模型；S2、納米炭黑顆粒和曲霉菌蛋白酶誘導的類ACO模型：從第0天起，將小鼠麻醉后鼻內滴入納米炭黑顆粒；納米炭黑顆粒處理結束2周后鼻內滴入曲霉菌蛋白酶溶液致敏小鼠，構建得到類ACO模型。本發明構建的類ACO模型能夠模擬臨床上慢阻肺患者疾病后期出現哮喘慢阻肺重疊的特征，為ACO發病機制及藥物治療研究提供實驗動物模型。

技術領域

本發明屬于醫學生物研究領域，特別涉及一種類哮喘慢阻肺重疊氣道炎癥小鼠模型的建立方法及其應用。

背景技術

哮喘慢阻肺重疊(Asthma-COPD overlap,ACO)為臨床上同時具有哮喘和慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)特征的疾病狀態，在阻塞性呼吸道疾病中發病率約為20％。全球哮喘報告^[1]指出與單純哮喘或COPD相比，ACO患者的肺功能下降更快，病情惡化更頻繁，已成為全球致殘率與死亡率高的主要疾病之一。然而，由于慢性氣道炎癥的異質性和不確定性以及缺乏對ACO的認知，大多數哮喘和COPD的臨床研究都排除ACO特征患者。并且，目前ACO臨床研究多僅從定義分型、分析疾病特征，相關動物模型研究暫缺，因此構建ACO模型具有重要意義。

目前國內外尚未建立公認的、穩定的ACO動物模型，僅Genyo Ikeda等^[2]采用卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)和胰蛋白酶(Porcine pancreatic elastase，PPE)誘導小鼠同時發生哮喘和肺氣腫。然而，OVA和PPE均不是引起哮喘和肺氣腫/COPD的天然致病因子，該模型存在以下不足：①盡管OVA是哮喘模型的經典方法，但在小鼠鼻內滴入OVA刺激前必須先采用腹腔注射OVA致敏方可成功建模，并不同于哮喘患者直接吸入空氣致敏原的發病過程；②通過一次性滴注彈性蛋白酶引起肺泡急性損傷導致的全小葉型肺氣腫模型也與COPD患者常見的長期吸煙刺激引起的小葉中央型肺氣腫的病理變化不一致。因此，上述造模方法并不符合ACO患者的自然發病過程，導致目前ACO模型的應用極為局限。

此外，雖然不少研究關注吸煙對哮喘模型的作用機制，但鮮有關于結合考慮長期吸入煙霧和哮喘致敏原的動物實驗，主要是由于下述的問題較難解決：①哮喘和肺氣腫/COPD的炎癥類型有所側重，小鼠同時吸入香煙和致敏原時容易引起兩種疾病特征的消失，并非簡單的疊加處理；②長期吸煙致的肺氣腫小鼠體質虛弱容易死亡，尤其吸入的致敏原為活性真菌孢子時更容易引起小鼠暴斃；③實驗過程中，氣道高反應性的檢測要求注射麻醉藥物且為侵入性有創操作，常規檢測結束后不能蘇醒小鼠，無法進行長期的動態檢測。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種類哮喘慢阻肺重疊氣道炎癥小鼠模型的建立方法。

本發明的另一目的在于提供所述類哮喘慢阻肺重疊氣道炎癥小鼠模型的建立方法的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種類哮喘慢阻肺重疊氣道炎癥小鼠模型的建立方法，通過如下任一種方式實現：

S1、吸煙(Smoke)和曲霉菌蛋白酶(Protease from Aspergillus Melleus，PAM)誘導的類ACO模型

(1)吸煙處理：小鼠從第0天(即當天)起每天吸入香煙的煙霧，每天4±1支，每周5±1天，共4～6月；

(2)致敏原處理：吸煙處理結束3～7天后，先將小鼠麻醉，然后鼻內滴入曲霉菌蛋白酶(PAM)溶液致敏小鼠，隔1～2天處理1次，共8～10次，構建得到類哮喘慢阻肺重疊氣道炎癥小鼠模型(ACO模型)；