[發明專利]一種穩定性好的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒、制備方法及用途

有效

• 申請號: 202010771208.9
• 申請日: 2020-08-04
• 公開（公告）號: CN111826417B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 龔婷;吳年芬;梁艷;張超;張雪嬌;舒芹;趙暢
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/44
• 分類號: C12Q1/44;C12Q1/34;C12Q1/26
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 張曉冬

本發明提供了一種穩定性好的N?乙酰?β?D?氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒，屬于生物檢測技術領域，包括試劑1和試劑2，所述試劑1包括檸檬酸、乙酸鈉、離子制劑、抗壞血酸氧化酶和PC?300；所述試劑2包括TIRS、穩定劑、亞鐵氰化鉀、表面活性劑、MPT?NAG、PC?300和脂蛋白酯酶。以6?甲基?2?硫代吡啶?N?乙酰?β?D?葡萄糖苷為底物，選擇合適的反應體系、緩沖液和pH值，可以讓底物更加穩定、抗干擾能力更好、靈敏度更高。本發明還提供了一種穩定性好的N?乙酰?β?D?氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒的制備方法及用途。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，涉及一種穩定性好的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒、制備方法及用途。

背景技術

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(簡稱NAG)是一種位于溶酶體內的酸性水解酶，又稱尿酶, 相對分子量約為140000。廣泛分布于人體各組織中，但在前列腺和腎臟近端腎小管中含量最高。NAG分子量約為130～140KD，在正常情況下，血清中NAG不能通過腎小球濾過從尿中排泄。尿中NAG的升高是腎臟疾病的早期表現，是腎小管損害的敏感指標。腎移植患者，尿NAG測定可早期發現排斥反應，一般在臨床指征前1-3天即有尿NAG增高。80年代后期在糖尿病腎病領域的應用研究不斷增加，其中值得注意的是糖尿病腎病早期尿NAG的升高可早于mALb的增加，這提示糖尿病腎小管損傷可早于腎小球損害。目前已形成一個新觀點，即主張把mALb和腎小管標記蛋白(NAG等)作為早期發現和監控糖尿病合并癥的常規指征。另外，尿NAG的監測在多種腎實質疾患中有不同程度的升高，是腎臟損害的較敏感指征，增高見于急慢性腎炎，休克引起的腎功能衰竭、腎病綜合癥、中毒性腎病等。研究表明，糖尿病、高血壓腎小球早期損傷、藥物腎毒性以及感染休克、腎移植排異反應等造成的腎小管損害時，尿中NAG的活性顯著增高，且早于其它尿酶，因此對腎小管損害的早期診斷有較大價值。

目前，NAG測定是應用率最高的尿液酶學診斷項目，其對腎小管損傷的反應很靈敏，此外，用尿液作為標本，是一種無創傷檢查，適合于日常檢驗和連續動態分析，也便于人群篩查的應用。NAG在臨床應用中的測定方法主要包括放免分析法、熒光分析法和紫外-可見分光光度法等，其中，分光光度法以合成色原底物為方法學主流。在NAG的作用下，底物發生分解，通過測定底物的分解產物在特定波長下的吸光度來判斷NAG的濃度。市面上一般會采用5-[4-(3-甲氧基-苯甲烯-繞丹寧)]-3-乙酸銨-N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷這個底物，但目前運用這個底物配制的試劑普遍存在著穩定性欠佳、分析靈敏度低等缺點。

發明內容

為了解決現有NAG檢測試劑穩定性欠佳、靈敏度低的技術問題，本發明提供了一種穩定性好的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒，選擇以6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-葡萄糖苷為底物，配以合適的反應體系、緩沖液和pH值，可以讓底物更加穩定、抗干擾能力更好、靈敏度更高。

本發明還提供了一種穩定性好的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒的制備方法及用途。

本發明通過以下技術方案實現：

一種穩定性好的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒，包括試劑1和試劑2，所述試劑1包括檸檬酸、乙酸鈉、離子制劑、抗壞血酸氧化酶和PC-300；所述試劑2包括TIRS、穩定劑、亞鐵氰化鉀、表面活性劑、MPT-NAG、PC-300和脂蛋白酯酶。

其中，所述試劑1中，各成分濃度為：

檸檬酸: 30-120mmol/L、乙酸鈉: 50-150mmol/L、離子制劑: 0.5-20mmol/L、抗壞血酸氧化酶: 1-10KU/L、PC-300: 1-5ml/L，pH=4.80-5.20。

進一步的，所述試劑2中，各成分濃度為：