[發明專利]用于篩查地中海貧血的特征蛋白標記組合物、質譜模型及其應用

有效

• 申請號: 202010767467.4
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111948404B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 孫德慧;王玉璽;李運濤;周曉光
• 申請（專利權）人: 融智生物科技（青島）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N27/62
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發明公開用于篩查地中海貧血的特征蛋白標記組合物、質譜模型及其應用。本發明首先公開了用于篩查地中海貧血的特征蛋白標記組合物，包括α?珠蛋白、β?珠蛋白、δ?珠蛋白、γ?珠蛋白和/或碳酸酐酶I，其序列分別如SEQ?ID?NO.1?5所示。本發明進一步公開了包含上述標記組合物的質譜模型及在制備篩查地中海貧血的產品中的應用。本發明基于MALDI?TOF質譜技術通過對不同特征蛋白的質譜峰面積以及比率分析，可篩查β地中海貧血、同時攜帶α和β地中海貧血、α地中海貧血、異常血紅蛋白樣本，具有樣本前處理簡便、檢測通量高、試劑耗材少、成本低、取樣量少、靈敏度高等特點，可在地中海貧血高發地區進行大規模人群篩查。

技術領域

本發明涉及生物技術領域。更具體地，涉及用于篩查地中海貧血的特征蛋白標記組合物、質譜模型及其應用。

背景技術

地中海貧血(簡稱地貧)，又稱珠蛋白生成障礙性貧血，是一種遺傳性溶血性貧血疾病，α地貧和β地貧是其中最主要的疾病類型。α地貧是由于α珠蛋白基因的缺失或突變而導致α珠蛋白鏈合成障礙所引起的遺傳性溶血性貧血。根據基因缺陷類型，α地貧分為缺失型和非缺失型。中國最常見的缺失型α地貧包括--^SEA、-α^3.7和-α^4.2，非缺失型α地貧包括HbConstant?Spring(HbCS)、Hb?Quong?Sze(HbQS)和Hb?Westmead(HbWS)。根據基因的缺陷程度不同，臨床上將α地貧分為靜止型(-α^3.7和-α^4.2)、輕型(--^SEA)、中間型(HbH病)和重型(HbBart’s)。α地貧的臨床表現與α珠蛋白鏈的合成減少程度相關，靜止型和輕型α地貧攜帶者可能無明顯臨床癥狀，如果父母雙方均為α地貧攜帶者，其下一代有可能是重型的α地貧患者。β地貧是由于β珠蛋白基因突變導致β珠蛋白鏈合成減少或缺失所引起的遺傳性溶血性貧血。根據表型分類，完全不能合成β鏈的稱為β0地貧，能部分合成β鏈的稱為β+地貧。β地貧最常見的突變類型是點突變，目前全世界已發現數百種突變類型，其中有17種突變在中國南方地區最常見。

由于地貧高發地區的人群地貧攜帶率高，該病患兒的治療費用昂貴且難以治愈，α、β地貧已成為中國南方控制出生缺陷的重大區域性疾病對象。通過人群篩查和產前診斷阻止患兒出生是目前國內外公認的首選預防措施，因此在中國南方地貧高發區進行地貧篩查和產前診斷尤為必要。

目前，地貧的傳統篩查技術以血液學分析為主，檢測地貧基因突變所引起的個體血液學指標的改變。血液學分析包括全血細胞分析和血紅蛋白組分分析，主要反映小細胞低色素貧血特征性的指標，如紅細胞平均體積(MCV)、紅細胞平均血紅蛋白量(MCH)和血紅蛋白A2(HbA2)含量等。血紅蛋白組分分析主要采用血紅蛋白電泳和高效液相色譜(HPLC)技術，對于β地貧和臨床癥狀明顯的中間型、重型α地貧，上述方法篩查成功率較高。但是對于表型不明顯的輕型α地貧，上述方法易發生漏篩。此外，傳統的地貧篩查技術單獨應用時，由于其特異性和靈敏度較低，尚不能滿足臨床需要。多種技術聯合檢測能夠提高篩查效果，存在流程復雜、耗時長、成本高、存在一定的漏篩率、對檢驗人員技術經驗要求高等問題，限制了其在大規模人群篩查中的應用。

地貧篩查陽性的個體被認為是疑似病例，進一步的確診需要進行基因診斷。基因診斷技術主要包括跨越斷裂點PCR法(Gap-PCR)、DNA測序和反向點雜交法(RDB)等。其中DNA測序可以鑒定未知突變，是基因檢測的金標準。Gap-PCR只能診斷缺失純合子，通常用于--^SEA型α地貧的篩查，反向點雜交法通常用于檢測基因突變。不過，由于基因診斷的方法復雜、技術要求高以及費用昂貴等原因，目前主要應用于醫院的臨床診斷，尚不能作為常規的大規模篩查手段。因此，開發更加準確、高效、經濟且簡便的地貧篩查手段十分必要。