[發(fā)明專利]用于篩查地中海貧血的特征蛋白標(biāo)記組合物、質(zhì)譜模型及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010767467.4
• 申請(qǐng)日: 2020-08-03
• 公開（公告）號(hào): CN111948404B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫德慧;王玉璽;李運(yùn)濤;周曉光
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 融智生物科技（青島）有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N27/62
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.用于篩查地中海貧血的特征蛋白標(biāo)記組合物，所述地中海貧血包括α地中海貧血、β地中海貧血和/或同時(shí)攜帶α和β地中海貧血；其特征在于，所述特征蛋白標(biāo)記組合物包括α-珠蛋白、β-珠蛋白、δ-珠蛋白、γ-珠蛋白和/或碳酸酐酶I，其中，所述α-珠蛋白、β-珠蛋白、δ-珠蛋白、γ-珠蛋白和碳酸酐酶I的序列分別如SEQ?ID?NO.1-5所示；

所述α-珠蛋白、β-珠蛋白、δ-珠蛋白、γ-珠蛋白和碳酸酐酶I質(zhì)譜檢測(cè)的質(zhì)荷比分別為：15127m/z、15868m/z、15924m/z、15995m/z和28762m/z，允許的質(zhì)荷比誤差為±0.1％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的特征蛋白標(biāo)記組合物，其特征在于，所述地中海貧血還包括非缺失型α地中海貧血Hb?CS，所述特征蛋白標(biāo)記組合物還包括用于篩查非缺失型α地中海貧血Hb?CS的α珠蛋白變體，其序列如SEQ?ID?NO.6所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的特征蛋白標(biāo)記組合物，其特征在于，所述α珠蛋白變體的質(zhì)譜檢測(cè)的質(zhì)荷比為18480m/z，允許的質(zhì)荷比誤差為±0.1％。

4.用于篩查地中海貧血的質(zhì)譜模型，其特征在于，所述質(zhì)譜模型包括權(quán)利要求1-3任一所述的特征蛋白標(biāo)記組合物；

其中，所述質(zhì)譜模型的制備方法包括：

1)收集待測(cè)患者和正常人的血液樣本分別作為待測(cè)樣本和對(duì)照樣本，并對(duì)待測(cè)樣本和對(duì)照樣本進(jìn)行前處理；

2)對(duì)前處理后的待測(cè)樣本和對(duì)照樣本進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)并采集待測(cè)樣本和對(duì)照樣本的質(zhì)譜圖；

3)對(duì)采集的質(zhì)譜圖進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，篩選出具有下列質(zhì)荷比的特征蛋白的質(zhì)譜峰：表征α珠蛋白質(zhì)譜峰的15127m/z、表征β珠蛋白質(zhì)譜峰的15868m/z、表征δ珠蛋白質(zhì)譜峰的15924m/z、表征γ珠蛋白質(zhì)譜峰的15995m/z和/或表征碳酸酐酶I質(zhì)譜峰的28762m/z，允許的質(zhì)荷比誤差為±0.1％，獲得對(duì)應(yīng)特征蛋白的質(zhì)譜峰面積，根據(jù)特征蛋白的質(zhì)譜峰、質(zhì)譜峰面積及δ/β比率和CA?I/δ比率建立用于篩查地中海貧血的質(zhì)譜模型；其中，δ/β比率為δ珠蛋白的質(zhì)譜峰面積與β珠蛋白的質(zhì)譜峰面積的比值，CA?I/δ比率為碳酸酐酶I的質(zhì)譜峰面積與δ珠蛋白的質(zhì)譜峰面積的比值；

在質(zhì)譜模型中設(shè)定δ/β比率的臨界值為0.1573，當(dāng)待測(cè)樣本的δ/β比率0.1573時(shí)，則判讀該待測(cè)樣本為β地中海貧血或同時(shí)攜帶α和β地中海貧血；當(dāng)待測(cè)樣本的δ/β比率≤0.1573時(shí)，則利用二元邏輯回歸模型分析δ/β和CA?I/δ比率，得到預(yù)測(cè)概率并設(shè)定預(yù)測(cè)概率的臨界值為0.45，當(dāng)預(yù)測(cè)概率≤0.45時(shí)，判讀該待測(cè)樣本為正常；當(dāng)預(yù)測(cè)概率0.45時(shí)，判讀該待測(cè)樣本為α地中海貧血。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)譜模型，其特征在于，所述制備方法還包括篩選質(zhì)荷比為18480m/z的表征非缺失型α地中海貧血Hb?CS的α珠蛋白變體的質(zhì)譜峰，在質(zhì)譜模型中當(dāng)待測(cè)樣本的質(zhì)譜圖相對(duì)于對(duì)照樣本的質(zhì)譜圖中出現(xiàn)非缺失型α地中海貧血Hb?CS的α珠蛋白變體的質(zhì)譜峰時(shí)，判讀該待測(cè)樣本為非缺失型α地中海貧血Hb?CS，

和/或，

所述制備方法還包括比較待測(cè)樣本相對(duì)于對(duì)照樣本的質(zhì)譜圖的γ珠蛋白的質(zhì)譜峰，在質(zhì)譜模型中當(dāng)待測(cè)樣本的質(zhì)譜圖相對(duì)于對(duì)照樣本的質(zhì)譜圖的γ珠蛋白的質(zhì)譜峰異常升高時(shí)，懷疑該待測(cè)樣本為β地中海貧血或遺傳性持續(xù)性胎兒血紅蛋白增高癥；

和/或，

所述制備方法還包括篩選待測(cè)樣本相對(duì)于對(duì)照樣本的異常質(zhì)荷比的質(zhì)譜峰，在質(zhì)譜模型中當(dāng)待測(cè)樣本的質(zhì)譜圖相對(duì)于對(duì)照樣本的質(zhì)譜圖中出現(xiàn)異常質(zhì)荷比的質(zhì)譜峰時(shí)，懷疑該待測(cè)樣本中存在異常血紅蛋白。

6.權(quán)利要求1-3任一所述的特征蛋白標(biāo)記組合物或權(quán)利要求4-5任一所述的質(zhì)譜模型在制備篩查地中海貧血癥的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

7.一種篩查地中海貧血癥的產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品除包括權(quán)利要求1-3任一所述的特征蛋白標(biāo)記組合物或權(quán)利要求4-5任一所述的質(zhì)譜模型外，還包括：樣品前處理試劑、質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)和/或軟件分析系統(tǒng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品還包括自動(dòng)鑒定軟件系統(tǒng)。