[發明專利]銀納米粒/硫量子點雙摻雜MOF復合物比率熒光外泌體適體探針的制備方法

在審

• 申請號: 202010766015.4
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111876147A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 桂日軍;姜曉文;金輝
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09K11/58;C09K11/56;G01N21/64
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 張世功

本發明公開了銀納米粒/硫量子點雙摻雜金屬有機骨架(MOF)復合物比率熒光外泌體適體探針的制備方法，銀納米粒(AgNPs)與前驅體反應，AgNPs摻雜在MOF結構中，鋅摻雜硫量子點(Zn?SQDs)吸附在MOF表面，然后附著適體/多巴胺(Aptamer/DA)復合物，形成納米復合物適體探針；外泌體(exosomes)與適體特異性結合成Aptamer/DA/exosomes復合物；因適體攜帶DA遠離MOF表面，引起Zn?SQDs藍熒光恢復，AgNPs紅熒光幾乎不變；擬合熒光峰強度比值Isubgt;Zn?SQDs/subgt;/Isubgt;AgNPs/subgt;與外泌體濃度之間的線性關系，構建比率熒光外泌體適體探針。

技術領域

本發明屬于金屬有機骨架納米復合物和比率熒光外泌體適體探針的制備技術領域，具體涉及基于銀納米粒和鋅-硫量子點雙摻雜金屬有機骨架復合物的比率熒光外泌體適體探針的制備方法，其制備的探針用于腫瘤外泌體的高效檢測。

背景技術

金屬有機骨架復合物Metal-organic?frameworks(MOF)具備諸多優點，如比表面積大、孔隙率高、晶格結構有序、穩定性好等，在功能納米載體方面展現出重要的應用前景。MOF與熒光體如有機染料分子、聚合物、有機/無機雜化物、納米材料等復合，形成熒光體在MOF內腔體或外表面負載的復合體系即熒光體摻雜的MOF復合物，發展為熒光納米探針，用于生化分析和生物傳感。

近年來，研究者證實外泌體是一種新型生物標志物，用于特定腫瘤細胞跨膜蛋白的精準識別，實現對特定腫瘤的早期篩查。外泌體是一種細胞外囊泡，泡體直徑為50～100nm，經過內溶體途徑從多囊體中釋放出來。外泌體含親本細胞中mRNA、DNA、跨膜和胞質蛋白等生物分子，作為介導細胞之間信息的信使單元，在疾病尤其是癌癥有關生理狀態及其變化的監測方面發揮關鍵的作用。

研究者報道了外泌體檢測的多種方法，如表面等離子體共振法、流式細胞分析法、顆粒追蹤分析法、比色法、發光分析法、電化學分析法等。傳統的探針和傳感器依賴于單信號強度變化的準確測量，在實際樣品的檢測中，單一信號強度會受到背景信號、系統誤差、傳感體系用量、測量環境變化，以及共存組分和溶劑等干擾。相比之下，比率法采用雙信號峰值比為信號輸出，避免了內在和外在因素的影響，有效提升了傳感體系的輸出信號對目標物檢測的準確性。

例如，Yujiao?Sun等設計了黑磷納米片與MOF組裝的功能雜化薄膜用于比率電化學傳感外泌體(Yujiao?Sun,Hui?Jin,Xiaowen?Jiang,Rijun?Gui.Assembly?of?blackphosphorous?nanosheets?and?MOF?to?form?functional?hybrid?thin–film?forprecise?protein?capture,dual–signal?and?intrinsic?self–calibration?sensing?ofspecific?cancer–derived?exosomes.Analytical?Chemistry,2020,92,2866–2875)，LiZhao等制備了3D?DNA步行器用于外切酶III-輔助電化學比率生物傳感外泌體(Li?Zhao,Ruijiao?Sun,Peng?He,Xiaoru?Zhang.Ultrasensitive?detection?of?exosomes?bytarget-triggered?three-dimensional?DNA?walking?machine?and?exonuclease?III-assisted?electrochemical?ratiometric?biosensing.Analytical?Chemistry,2019,91,14773–14779)，肖義等開發了基于兩種熒光染料的比率定量用于外泌體的測定(肖義；李寧；張新富；陳令成.一種利用熒光比率進行外泌體快速定量的方法.國家發明專利.公布號CN108169199A)。