[發(fā)明專利]銀納米粒/硫量子點雙摻雜MOF復(fù)合物比率熒光外泌體適體探針的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010766015.4
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111876147A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 桂日軍;姜曉文;金輝
• 申請（專利權(quán)）人: 青島大學(xué)
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09K11/58;C09K11/56;G01N21/64
• 代理公司: 青島高曉專利事務(wù)所(普通合伙) 37104
• 代理人: 張世功

1.一種銀納米粒/硫量子點雙摻雜MOF復(fù)合物比率熒光外泌體適體探針的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：

(1)制備鋅摻雜硫量子點Zn-SQDs：在攪拌下向75mL二次蒸餾水中加入1.5g升華硫，3mL聚乙二醇PEG-400和4g氫氧化鈉，形成均質(zhì)混合液；轉(zhuǎn)入含100mL聚四氟乙烯內(nèi)襯的微型高壓反應(yīng)釜中，在70℃下攪拌反應(yīng)5h；冷卻產(chǎn)物溶液至室溫，取5mL產(chǎn)物溶液，在攪拌下加入5mL濃度為5wt％的硝酸鋅水溶液，繼續(xù)攪拌30min，制得Zn-SQDs水分散液；

(2)制備銀納米粒AgNPs：在攪拌下向50mL二次蒸餾水中加入50mg硫辛酸粉末，加入0.3mL濃度為1mol?L^-1的硼氫化鈉水溶液，攪拌反應(yīng)30min，形成均質(zhì)混合液；加入0.3mL濃度為0.1mol?L^-1的硝酸銀，再加入0.8mL濃度為1mol?L^-1的硼氫化鈉水溶液，繼續(xù)攪拌2h，制得AgNPs水分散液；

(3)制備AgNPs和Zn-SQDs雙摻雜的MOF復(fù)合物AgNPs/Zn-SQDs/MOF：在攪拌下向10mL的2-甲基咪唑甲醇溶液中加入1mL濃度為1～10mg?mL^-1的AgNPs水分散液，攪拌10min形成混合液；再加入10mL六水合硝酸鋅水溶液，攪拌30min形成沉淀物，用乙醇和蒸餾水洗滌三次，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心10min，制得AgNPs/MOF復(fù)合物水分散液；在攪拌下加入1mL濃度為1～10mg?mL^-1的Zn-SQDs水分散液，攪拌反應(yīng)2h；產(chǎn)物經(jīng)離心得沉淀物，沉淀物經(jīng)洗滌和干燥制得AgNPs/Zn-SQDs/MOF水分散液；

(4)制備比率熒光外泌體適體探針：配制濃度為1～10μmol?L^-1的CD63跨膜蛋白對應(yīng)單鏈DNA適體Aptamer的磷酸鹽水PBS緩沖液，在攪拌下加入多巴胺DA，在37℃下孵育30～120min，DA濃度為0.1～1μmol?L^-1，形成Aptamer/DA復(fù)合物；在攪拌下將此復(fù)合物加入AgNPs/Zn-SQDs/MOF水分散液中，在37℃下孵育1～6h，制得AgNPs/Zn-SQDs/MOF/Aptamer/DA納米復(fù)合物水分散液；加入從乳腺癌MCF-7細(xì)胞提取的外泌體的PBS緩沖液，形成均質(zhì)混合液；測量混合液的熒光發(fā)射光譜，擬合熒光峰強(qiáng)度比值I_Zn-SQDs/I_AgNPs與外泌體濃度之間的線性關(guān)系，構(gòu)建用于外泌體檢測的比率熒光探針；外泌體濃度的線性檢測范圍為5×10¹～1×10⁶particles?μL^–1，檢測限為10～50particles?μL^–1。