[發明專利]一種重組PCV2病毒樣顆粒蜂膠疫苗及其制備方法有效
| 申請號： | 202010764917.4 | 申請日： | 2020-08-03 |
| 公開（公告）號： | CN112010949B | 公開（公告）日： | 2021-07-27 |
| 發明（設計）人： | 沈志強;曲光剛;武曰星;王長江;董林;程立坤;郭廣君 | 申請（專利權）人： | 山東綠都生物科技有限公司;山東省濱州畜牧獸醫研究院 |
| 主分類號： | C07K14/01 | 分類號： | C07K14/01;C12N15/34;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498 | 代理人： | 王加嶺 |
| 地址： | 256600 山東省濱*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 pcv2 病毒 顆粒 蜂膠 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種豬圓環病毒2型Cap蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。
2.一種編碼權利要求1所述的豬圓環病毒2型Cap蛋白的核酸分子，其特征在于，其堿基序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一種含有權利要求2所述的核酸分子的載體，所述載體為重組表達載體或重組克隆載體，所述載體為由所述核酸分子插入pET28a載體得到。
4.一種含有如權利要求3所述的重組表達載體的重組菌。
5.根據權利要求4所述的重組菌，其特征在于，由所述的重組表達載體轉化大腸桿菌得到，所述大腸桿菌為無致病性內毒素的大腸桿菌ClearColiTMBL21（DE3）。
6.一種制備PCV2病毒樣顆粒蜂膠疫苗的方法，其特征在于，包括：培養權利要求5所述的重組菌，從培養產物中分離純化得到權利要求1所述的Cap蛋白。
7.根據權利要求6所述的制備PCV2病毒樣顆粒蜂膠疫苗的方法，其特征在于，包括：
（1）將SEQ ID No：2所述的編碼所述豬圓環病毒2型Cap蛋白的核酸分子插入到pET28a表達載體，得到重組載體；
（2）將重組載體轉化無致病性內毒素的大腸桿菌ClearColiTMBL21（DE3），構建重組表達菌；
（3）應用高密度發酵與高效表達技術，使用市售培養基，對PCV2 Cap蛋白進行高效可溶表達；
（4）收集培養發酵的菌，分離純化獲得PCV2 Cap病毒樣顆粒；
（5）以所述PCV2 Cap病毒樣顆粒為活性成分，制備PCV2 Cap病毒樣顆粒疫苗。
8.根據權利要求7所述的方法，所述分離純化包括：所收集的培養發酵的菌，高壓均質破碎后，利用親和層析柱純化PCV2 Cap病毒樣顆粒。
9.根據權利要求7所述方法制備得到的PCV2 Cap病毒樣顆粒疫苗，所述的PCV2 Cap病毒樣顆粒疫苗中PCV2 Cap病毒樣顆粒為活性成分或者活性成分之一。
10.根據權利要求7所述方法中制備得到的所述的PCV2 Cap病毒樣顆粒在制備預防和/或治療PCV2引發的疾病的藥物中的應用。
11.根據權利要求7所述方法中制備得到的所述的PCV2 Cap病毒樣顆粒在制備預防和/或治療PCV2引發的疾病的疫苗中的應用。
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