[發(fā)明專利]一株產(chǎn)納豆激酶的菌株及利用該菌株制備納豆激酶產(chǎn)品的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010764791.0
• 申請日: 2020-07-31
• 公開（公告）號: CN111748502B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 潘冬梅;蔡穎輝;楊傳倫;王建平;李超孟;張心青;王秀芝;虞鳳慧;楊丹丹;蔡倩倩
• 申請（專利權(quán)）人: 黃河三角洲京博化工研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K38/48;A61K9/20;A61P7/02;A61P1/16;A61K31/685;C12R1/125
• 代理公司: 濟南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 趙斌;苗峻

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，提供了一株產(chǎn)納豆激酶的菌株及利用該菌株制備納豆激酶產(chǎn)品的方法，所涉及的產(chǎn)納豆激酶的菌株，經(jīng)16SrDNA鑒定為一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，菌株代碼為YJY20?05，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC NO.20017。該菌株應(yīng)用于納豆激酶液體發(fā)酵中酶活較原始菌株發(fā)酵水平提高1倍、時間縮短1倍，納豆激酶提取純化后,先制成微膠囊后與卵磷脂復(fù)合制備納豆激酶片，可獲得納豆激酶含量為2000FU/片、卵磷脂含量0.3g/片的納豆激酶片劑，既保證了納豆激酶的活性又強化了預(yù)防和治療血栓性疾病的功能。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，提供了一株產(chǎn)納豆激酶的菌株及利用該菌株制備納豆激酶產(chǎn)品的方法。

背景技術(shù)

血栓性疾病是一般由血液中的血小板、纖維蛋白、白細(xì)胞等物質(zhì)粘聯(lián)而形成的血栓，隨著血栓的不斷增大，造成了血管阻塞甚至封閉，使機體的一些器官因缺血而引發(fā)功能性障礙的各種疾病。血栓性疾病的致殘和致死的概率都較高，是一種嚴(yán)重危害人類健康和生命的疾病。據(jù)報道，中國血栓性疾病的患者已經(jīng)達到1000萬以上，并且每年新增的患者大約有150～200萬人，每年都有超過300萬人進行血栓治療。伴隨著老齡化社會的到來，估計患病人數(shù)會有進一步的增加，所以血栓性疾病已經(jīng)是對我們健康威脅的主要疾病之一。

納豆激酶(nattokinase，NK)是由納豆枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis natto)產(chǎn)生的一種具有纖溶活性的絲氨酸蛋白酶，易溶于水，固態(tài)呈淡黃色或白色，無二硫鍵，一般為單鏈多肽結(jié)構(gòu)。納豆激酶的脫氧核糖核酸序列由275個氨基酸殘基構(gòu)成，相對分子質(zhì)量一般為28000u。該酶N末端為丙氨酸，等電點為8.6±0.3。在室溫下，酶活性在pH值6.0～12.0的范圍內(nèi)具有很強的纖維蛋白水解能力，酶反應(yīng)的最適pH值一般為8，酸性和強堿性條件下會迅速失活。其酶活力不易受反復(fù)凍融影響，溫度達50℃以上時酶活性會逐漸喪失，超過60℃酶迅速失活，其最適溫度為45℃。

納豆激酶具有良好的溶解血栓的功效，與傳統(tǒng)的溶栓藥物鏈激酶、尿激酶相比具有藥理作用直接且多元化、體內(nèi)半衰期長、分子量相對較小可直接通過胃腸系統(tǒng)被人體吸收、安全性高、價格便宜等諸多優(yōu)點。Kim J.Y.et al.Effects of nattokinase on bloodpressure:a randomized,controlledtrial.研究表明20～80歲高血壓患者口服納豆激酶膠囊(2000FU/天)8周后，舒張壓和收縮壓均較對照組(服用安慰劑)明顯降低。然而目前國內(nèi)的納豆激酶產(chǎn)品活性普遍比較低,篩選具有高活力納豆激酶生產(chǎn)能力的菌株及制備高活性的納豆激酶活性產(chǎn)品,作為預(yù)防和治療血栓性疾病具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述技術(shù)存在的不足，提供一株產(chǎn)納豆激酶的菌株及利用該菌株制備納豆激酶產(chǎn)品的方法，所涉及的產(chǎn)納豆激酶的菌株，經(jīng)16SrDNA鑒定為一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，菌株代碼為YJY20-05，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC NO.20017。該菌株應(yīng)用于納豆激酶液體發(fā)酵中酶活較原始菌株發(fā)酵水平提高1倍、時間縮短1倍，納豆激酶提取純化后,先制成微膠囊后與卵磷脂復(fù)合制備納豆激酶片，可獲得納豆激酶含量為2000FU/片、卵磷脂含量0.3g/片的納豆激酶片劑，既保證了納豆激酶的活性又強化了預(yù)防和治療血栓性疾病的功能。

本發(fā)明提供的具體技術(shù)方案是：

本發(fā)明首先提供了一株新的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，該菌株來源與市場上的原始菌株，其具體獲得過程如下：