[發(fā)明專利]一株產(chǎn)納豆激酶的菌株及利用該菌株制備納豆激酶產(chǎn)品的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010764791.0
• 申請日: 2020-07-31
• 公開（公告）號: CN111748502B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘冬梅;蔡穎輝;楊傳倫;王建平;李超孟;張心青;王秀芝;虞鳳慧;楊丹丹;蔡倩倩
• 申請（專利權(quán)）人: 黃河三角洲京博化工研究院有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K38/48;A61K9/20;A61P7/02;A61P1/16;A61K31/685;C12R1/125
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 趙斌;苗峻

1.一株產(chǎn)納豆激酶的菌株，保藏編號為CGMCC NO.20017，命名為YJY20-05，屬于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)；

所述的產(chǎn)納豆激酶的菌株，其16S rDNA的核苷酸序列如Seq ID No:1所示。

2.利用權(quán)利要求1所述菌株進(jìn)行納豆激酶相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)方法，其特征在于：具體步驟包括：

(1)納豆激酶發(fā)酵液的制備：包括種子制備、液體深層發(fā)酵；

(2)納豆激酶精品液的制備：包括納豆激酶的純化；

(3)納豆激酶片劑的制備：包括納豆激酶微膠囊干粉的制備、納豆激酶片劑的制備。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的納豆激酶相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)方法，其特征在于：

所述納豆激酶發(fā)酵液的制備包括以下步驟：

1)種子制備：在無菌操作臺(tái)上，將活化的試管斜面菌種用接種針刮取1環(huán)到100ml LB培養(yǎng)基中，搖床溫度33℃～37℃、轉(zhuǎn)速160r/min～200r/min，振蕩培養(yǎng)18～24h，檢測OD600＝0.5～0.8時(shí)停止培養(yǎng)，得到種子液；

2)液體深層發(fā)酵：取制備好的種子液，按照1％～5％(v/w)的接種量接種于滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行深層發(fā)酵，獲得納豆激酶發(fā)酵液；

液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件如下：

液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基組成，按重量百分比計(jì)為：葡萄糖0.8％～2％、木糖1％～3％、大豆蛋白胨1％～2％、硫酸銨0.3％～0.8％、氯化鈣0.01％～0.03％、硫酸氫二鈉0.08％～0.13％、硫酸二氫鈉0.05％～0.08％、氯化亞鐵0.003％～0.005％、豆油0.5％～1％，加水至1000mL，pH7.2～7.4；

液體深層發(fā)酵條件為：培養(yǎng)溫度33℃～37℃，搖床轉(zhuǎn)速160r/min～200r/min，培養(yǎng)時(shí)間為32～40h，檢測納豆激酶含量達(dá)到1053～1214FU/mL停止發(fā)酵。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的納豆激酶相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)方法，其特征在于：包括精品納豆激酶液的制備，包括以下步驟：

取納豆激酶發(fā)酵液，4000～6000rpm離心15～25min，取上清液；選用截留分子量為100KD的濾膜，在0.05～0.20MPa，10～35℃，pH6～8條件下超濾，收集過濾液；選用截留分子量為1KD的超濾膜，在0.05～0.20MPa，10～35℃，pH6～8條件下超濾，收集1KD超濾膜截留液，即為精品納豆激酶液，經(jīng)過檢測其納豆激酶含量為2578～2961FU/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的納豆激酶相關(guān)產(chǎn)品的生產(chǎn)方法，其特征在于：包括納豆激酶片劑的制備，包括以下步驟：

1)納豆激酶微膠囊干粉的制備

納豆激酶微膠囊的制備：室溫下，取精品納豆激酶液，按重量比為1:1加入3％明膠溶液，連續(xù)攪拌，再按納豆激酶液重量比為1:1攪拌加入1％海藻酸鈉溶液獲得混懸液，然后將混懸液分散在按納豆激酶液重量比為1:7的蒸餾水中，用10％醋酸水溶液緩慢調(diào)節(jié)pH至4.2，用冰水浴降溫至5℃以下，持續(xù)攪拌，緩慢向體系中滴加納豆激酶液按重量比為1:1的濃度0.1g/mL CaCl₂水溶液，再向體系中加入納豆激酶液按重量比為300:1硅酸鋁鎂，即得到納豆激酶微膠囊濕產(chǎn)品，濕產(chǎn)品壓濾后減壓干燥即得粉末狀產(chǎn)品，即可獲得納豆激酶含量為26212～28943FU/g的納豆激酶微膠囊干粉；

2)納豆激酶片劑的制備：按重量份取上述制備的納豆激酶微膠囊干粉6.91～7.63份，加入卵磷脂干粉50份，均勻混合，再加入麥芽糊精20份、預(yù)膠化淀粉11.57～17.29份、微晶纖維素5～10份、硬脂酸鎂0.8份混合均勻制備納豆激酶片劑，可獲得納豆激酶含量為2000FU、卵磷脂含量為0.3g的0.6g每片納豆激酶片。