[發明專利]一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法

在審

• 申請號: 202010764701.8
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111735898A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 智緒;崔漢立;楊兵;闞蘇立;朱旨昂
• 申請（專利權）人: 南京江北新區生物醫藥公共服務平臺有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 蔣真

1.一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，其特征是包括如下步驟：該方法包括采用超高效液相色譜串聯三重四級桿質譜（UPLC-MS/MS），以十八烷基硅烷鍵合硅膠填料柱為色譜柱，以乙腈為有機相與揮發性鹽試劑溶液為水相混合作為流動相，進行洗脫，以質譜檢測器進行檢測; 所述檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，進一步包括以下步驟 ：

（1）取紫杉醇對照品適量，加50%甲醇水溶液溶解并稀釋制成每1ml中含0.1μg的溶液，作為紫杉醇濃配液；取多烯紫杉醇對照品適量，加50%甲醇水溶液溶解并稀釋制成每1ml中含1μg的溶液，作為多烯紫杉醇濃配液；

（2）取50μL空白血漿，加適量的多烯紫杉醇濃配液，加適量紫杉醇濃配液，加900μL叔丁基甲醚，渦旋震蕩1min；-80℃冰箱冷凍1h；取出復溫30min；渦旋震蕩1min，隨后8000r/min離心5min；移取500μL上清液于玻璃試管中，40℃氮氣吹干；加入500μL 50%甲醇水復溶，渦旋1min；過0.22μm濾膜進樣分析，作為線性對照品溶液；

（3）取50μL血漿樣品，加50μL多烯紫杉醇濃配液，加900μL叔丁基甲醚，渦旋震蕩1min；-80℃冰箱冷凍1h；取出復溫30min；渦旋震蕩1min，隨后8000r/min離心5min；移取500μL上清液于玻璃試管中，40℃氮氣吹干；加入500μL 50%甲醇水復溶，渦旋1min；過0.22μm濾膜進樣分析，作為血漿樣品溶液；

（4）將肺組織樣品勻漿處理，精密稱取50mg，加50μL水渦旋，加50μL多烯紫杉醇濃配液，加900μL叔丁基甲醚，渦旋震蕩1min；-80℃冰箱冷凍1h；取出復溫30min；渦旋震蕩1min，隨后8000r/min離心5min；移取500μL上清液于玻璃試管中，40℃氮氣吹干；加入500μL 50%甲醇水復溶，渦旋1min；過0.22μm濾膜進樣分析，作為肺組織樣品溶液；

（5）質譜條件為離子源為ESI（+），檢測方式為多反應監測（MRM）方式，噴霧電壓5500 V，離子源溫度550℃，Curtain Gas 25 psi，Ion Source Gas1 50 psi，Ion Source Gas2 60psi，駐留時間100 msec；其它MRM 參數見表1：

表1紫杉醇含量檢測MRM參數表

（6）采用內標法以峰面積計算紫杉醇的含量，定量離子采用豐度最大的二級碎片。

2.根據權利要求1所述的一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，其特征是所述揮發性鹽試劑溶液的濃度為0.5～5mmol/L。

3. 所述揮發性鹽試劑溶液為乙酸銨，pH 值調節劑甲酸，pH 值調節劑含量為0.01～0.5%。

4.根據權利要求1所述的一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，其特征是所述洗脫采用梯度洗脫方法，在0～4.0 min，有機相的洗脫體積比為50%，4.0～6.0min，有機相的洗脫體積比為50%～95％，6.0～7.0 min，有機相的洗脫體積比為95%，7.0～7.1 min，有機相的洗脫體積比為95%～50％，7.1～10.0 min， 有機相的洗脫體積比為50％。

5.根據權利要求1所述的一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，其特征是所述檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法的流速為0.8ml/min～1.2ml/min。

6.根據權利要求1所述的一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，其特征是所述檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法的柱溫為43℃～47℃。