[發明專利]一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法

在審

• 申請號: 202010764701.8
• 申請日: 2020-08-03
• 公開（公告）號: CN111735898A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 智緒;崔漢立;楊兵;闞蘇立;朱旨昂
• 申請（專利權）人: 南京江北新區生物醫藥公共服務平臺有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 蔣真

一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，其特征是包括如下步驟：該方法包括采用超高效液相色譜串聯三重四級桿質譜（UPLC?MS/MS），以十八烷基硅烷鍵合硅膠填料柱為色譜柱，以乙腈為有機相與揮發性鹽試劑溶液為水相混合作為流動相，進行洗脫，以質譜檢測器進行檢測。該方法專屬性好，靈敏度高，樣品前處理簡單，快速、準確的檢測生物樣本中紫杉醇的含量，從而保證藥品在臨床階段的安全性。

技術領域

本發明涉及藥物動力學分析領域，具體涉及一種測定老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的分析方法。

背景技術

紫杉醇是一種四環二萜化合物，為白色或類白色粉末，脂溶性高，從紅豆杉屬植物中提取，屬于天然的抗癌活性的化合物。紫杉醇具有特有的微管活性，與細胞微管蛋白結合后，可以在癌細胞分裂時，誘導和促進微管蛋白的聚合，進而抑制其解聚，使細胞有絲分裂受到阻斷，阻止癌細胞增殖，具有多種抗腫瘤作用。紫杉醇作為一種很有應用價值的抗癌藥物，被廣泛用于軟巢癌、乳腺癌、非小細胞肺癌、胃癌、喉癌、肝癌、食道癌、膀胱癌等惡性腫瘤的治療。因此，基于安全性評估，紫杉醇在藥代學的分析方法是非常重要的。

目前紫杉醇的檢測分析可以用高效液相色譜法和液相串聯質譜法來進行檢測。

高效液相色譜法和液相串聯質譜法缺點：1）靈敏度低，在生物樣本中，當紫杉醇的含量偏低時，這兩種方法都不能很好的分析;2) 分析時間長，檢測效率低，在藥代動力學研究中，需要分析的樣本比較多，分析時間長，會導致檢測效率低，試劑消耗大，因此一種分析快速便捷的分析方法是非常有必要的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，該方法專屬性好，靈敏度高，樣品前處理簡單，快速、準確的檢測生物樣本中紫杉醇的含量，從而保證藥品在臨床階段的安全性。

本發明的技術方案如下：

一種檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，其特征是包括如下步驟：該方法包括采用超高效液相色譜串聯三重四級桿質譜（UPLC-MS/MS），以十八烷基硅烷鍵合硅膠填料柱為色譜柱，以乙腈為有機相與揮發性鹽試劑溶液為水相混合作為流動相，進行洗脫，以質譜檢測器進行檢測。

所述揮發性鹽試劑溶液的濃度為0.5～5mmol/L。 所述揮發性鹽試劑溶液為乙酸銨，pH 值調節劑甲酸，pH 值調節劑含量為0.01～0.5%。

所述洗脫采用梯度洗脫方法，在0～4.0 min，有機相的洗脫體積比為50%，4.0～6.0 min，有機相的洗脫體積比為50%～95％，6.0～7.0 min，有機相的洗脫體積比為95%，7.0～7.1 min，有機相的洗脫體積比為95%～50％，7.1～10.0 min， 有機相的洗脫體積比為50％。

所述檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法的流速為0.8ml/min～1.2ml/min。

所述檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法的柱溫為43℃～47℃。

所述檢測老鼠肺組織和血漿中紫杉醇含量的檢測方法，進一步包括以下步驟 ：

（1）取紫杉醇對照品適量，加50%甲醇水溶液溶解并稀釋制成每1ml中含0.1μg的溶液，作為紫杉醇濃配液；取多烯紫杉醇對照品適量，加50%甲醇水溶液溶解并稀釋制成每1ml中含1μg的溶液，作為多烯紫杉醇濃配液；

（2）取50μL空白血漿，加適量的多烯紫杉醇濃配液，加適量紫杉醇濃配液，加900μL叔丁基甲醚，渦旋震蕩1min。-80℃冰箱冷凍1h；取出復溫30min。渦旋震蕩1min，隨后8000r/min離心5min。移取500μL上清液于玻璃試管中，40℃氮氣吹干；加入500μL 50%甲醇水復溶，渦旋1min；過0.22μm濾膜進樣分析，作為線性對照品溶液；