[發(fā)明專利]一種大規(guī)模發(fā)酵鐵蛋白的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010760119.4
• 申請(qǐng)日: 2020-07-31
• 公開（公告）號(hào): CN111733123B
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 柯天一;姚德惠;勞芳;張澤譯;希倫;丁鳳姣;王曉飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 昆山新蘊(yùn)達(dá)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12P21/00;C07K14/47;C12R1/19
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 宋秀蘭

1.一種發(fā)酵制備鐵蛋白的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將包含如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的人HFn編碼基因的重組大腸桿菌的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；

（2）發(fā)酵培養(yǎng)得到發(fā)酵液，其中發(fā)酵培養(yǎng)包括補(bǔ)料培養(yǎng)的步驟，所述補(bǔ)料培養(yǎng)是當(dāng)所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源耗盡時(shí)進(jìn)行補(bǔ)料，補(bǔ)料培養(yǎng)至OD₆₀₀在30-60時(shí)停止補(bǔ)料，此為第一次補(bǔ)料，而后加入誘導(dǎo)劑，5-20分鐘后繼續(xù)補(bǔ)料至發(fā)酵結(jié)束，此為第二次補(bǔ)料；誘導(dǎo)10-20h后終止發(fā)酵，得到發(fā)酵液；所述第一次補(bǔ)料期內(nèi)通過調(diào)控補(bǔ)料速率，維持菌體的比生長速率為0.08~0.16 h^-1；所述第二次補(bǔ)料期內(nèi)通過調(diào)控補(bǔ)料速率維持菌體的比生長速率為0.02~0.08 h^-1；所述誘導(dǎo)劑為阿拉伯糖，所述阿拉伯糖的濃度為2-10g/L；

（3）收集發(fā)酵液中的菌體；

（4）破碎收集的菌體，離心，取上清液，即得；

所述的發(fā)酵培養(yǎng)基由如下組分組成：酵母蛋白胨20g/L、酵母抽提物16g/L、氯化鈉1.2g/L、氯化銨1.2g/L、十二水合磷酸氫二鈉16g/L、磷酸二氫鉀2g/L、七水合硫酸鎂0.5g/L和葡萄糖16g/L；

所述第一次補(bǔ)料和第二次補(bǔ)料的培養(yǎng)基配方如下：酵母提取物180g/L，葡萄糖520g/L，七水合硫酸鎂10g/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）包括如下步驟：將所述發(fā)酵液在2-25℃以5000-12000 rpm離心15-30min，收集菌體；

步驟（4）包括如下步驟：取所述收集的菌體用緩沖液重懸，裂解2-4次，離心，取上清液，即得。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述緩沖液為10-50mM Tris-HCl緩沖液，pH 7.5~8.5。