[發明專利]一種聯合檢驗COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡

在審

• 申請號: 202010749827.8
• 申請日: 2020-07-30
• 公開（公告）號: CN111999492A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發明（設計）人: 陳振;李煥杰;歐蘭香;王巖;丁興龍;郎偉超;汪運山;朱之煒
• 申請（專利權）人: 山東萊博生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 陳桂玲

1.一種聯合檢驗新型冠狀病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡，所述檢測卡由卡殼、設置于卡殼上的兩個加樣孔和含有COVID-19N抗原檢測試紙條或COVID-19S蛋白抗體檢測試紙條的兩個觀察窗構成，其特征在于：

所述卡殼上的加樣孔與觀察窗間隔狀直線排列，每組加樣孔與觀察窗同方向設置且間隔狀平行排列；所述COVID-19N抗原檢測試紙條由依次相連的第一樣品墊、第一結合墊、第一反應墊和第一吸水墊構成；其中所述第一結合墊上噴有膠體金標記的新型冠狀病毒COVID-19N蛋白單克隆抗體，所述第一反應墊上沿樣品流動方向依次設有第一檢測線和第一質控線，第一檢測線上包被有新型冠狀病毒COVID-19N蛋白捕獲抗體，第一質控線上包被有羊抗鼠IgG抗體；所述COVID-19S蛋白抗體檢測試紙條由依次相連的第二樣品墊、第二結合墊、第二反應墊和第二吸水墊構成；其中所述第二結合墊上噴有膠體金標記的新型冠狀病毒COVID-19重組S蛋白抗原；所述第二反應墊上沿樣品流動方向依次設有第二檢測線、第三檢測線和第二質控線，第二檢測線上包被有抗人IgM抗體，所述第三檢測線上包被有抗人IgG抗體，第二質控線上包被有羊抗鼠IgG抗體；所述COVID-19N抗原檢測試紙條或COVID-19S蛋白抗體檢測試紙條分別設置在卡殼上的每組加樣孔與觀察窗所在的位置，每組中的加樣孔與所述第一樣品墊或第二樣品墊相對應，組中相應的觀察窗與所述第一反應墊或第二反應墊相對應；所述第一反應墊上的第一檢測線與第一質控線的間距不少于1cm，所述第二反應墊上第二檢測線、第三檢測線和第二質控線之間的距離不少于1cm。

2.根據權利要求1所述的聯合檢驗新型冠狀病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡，其特征在于：所述膠體金標記中所采用的膠體金的粒徑為20-30nm；膠體金的質量比濃度為萬分之六。

3.根據權利要求1或2所述的聯合檢驗新型冠狀病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡，其特征在于：所述新型冠狀病毒COVID-19N蛋白單克隆抗體與膠體金的結合濃度為每100ml體金濃液加入0.8mg N蛋白單克隆抗體；所述新型冠狀病毒COVID-19重組S蛋白抗原與膠體金的結合濃度為每100ml體金濃液加入0.8mg重組S蛋白抗原。

4.根據權利要求1所述的聯合檢驗新型冠狀病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡，其特征在于：第一檢測線上包被有濃度為1.2mg/ml的新型冠狀病毒COVID-19N蛋白捕獲抗體；第二檢測線上包被有濃度為1.8mg/ml的抗人IgM抗體，所述第三檢測線上包被有濃度為1.6mg/ml的抗人IgG抗體。

5.根據權利要求1所述的聯合檢驗新型冠狀病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡，其特征在于：第二結合墊上噴有膠體金標記的新型冠狀病毒COVID-19重組S蛋白抗原及鼠IgG，其中重組S蛋白抗原與鼠IgG的體積比為2:1。

6.根據權利要求1所述的聯合檢驗新型冠狀病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡，其特征在于：所述第一或第二樣品墊采用玻纖SB06，所述第一或第二結合墊為玻纖8965，所述第一或第二反應墊為賽多利斯CN140。

7.根據權利要求1所述的聯合檢驗新型冠狀病毒COVID-19N抗原和S蛋白抗體的膠體金免疫層析檢測卡，其特征在于，所述新型冠狀病毒COVID-19N蛋白以如下方法制得：

克隆新型冠狀病毒COVID-19N蛋白基因序列，將其連入表達載體pET-28，構建重組表達載體pET-28-N，經測序鑒定正確后轉化至表達菌E.coli Rosetta中，以IPTG誘導蛋白表達，收集發酵產物進行超聲破碎，經Ni柱純化即制得新型冠狀病毒COVID-19N蛋白；其中，所述表達載體pET-28的N端、C端均帶有6×His標簽。