[發明專利]提高蛋白表達量的信號肽及其應用有效
| 申請號： | 202010749129.8 | 申請日： | 2020-07-30 |
| 公開（公告）號： | CN111808177B | 公開（公告）日： | 2022-06-21 |
| 發明（設計）人： | 佟毅;李義;陶進;劉松;徐奎棟;李江華;陳堅 | 申請（專利權）人： | 吉林中糧生化有限公司;江南大學 |
| 主分類號： | C07K14/32 | 分類號： | C07K14/32;C12N15/31;C12N15/75;C12N9/44;C07K19/00;C07K14/435;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇鈺瑩 |
| 地址： | 130000 吉林省長*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 提高 蛋白 表達 信號肽 及其 應用 | ||
1.編碼信號肽的核苷酸，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3任一所示。
2.一種提高枯草芽孢桿菌胞外蛋白表達量的方法，其特征在于，向編碼蛋白的核苷酸序列的N端添加權利要求1所述編碼信號肽的核苷酸，所述蛋白為普魯蘭酶。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）在蛋白的N端添加權利要求1所述編碼信號肽的核苷酸，獲得編碼重組蛋白的基因；
（2）構建表達步驟（1）所述基因的重組質粒，再將構建的重組質粒導入枯草芽孢桿菌。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述普魯蘭酶的NCBI登錄號為AMQ67157。
5.一種重組質粒，其特征在于，連接有核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQID NO.3所示的編碼信號肽的核苷酸。
6.一種提高蛋白表達量的方法，其特征在于，利用含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3所示任一的編碼信號肽的核苷酸的基因工程菌發酵生產蛋白，所述蛋白為NCBI登錄號為AMQ67157的普魯蘭酶。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，將所述重組菌以1~10mL/100mL的接種量接種至培養體系中，所述基因工程菌接種時的OD600不低于3.0。
8.一種宿主細胞，其特征在于，含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3所示任一的編碼信號肽的核苷酸，或含有權利要求5所述重組質粒。
9.權利要求1所述編碼信號肽的核苷酸，或權利要求2~4或權利要求6或7任一所述方法，或權利要求5所述重組質粒，或權利要求8所述宿主細胞在提高普魯蘭酶表達量中的應用。
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