[發(fā)明專利]利用熒光淬滅時(shí)間差進(jìn)行的染色方法及自動(dòng)染色裝置、設(shè)備和介質(zhì)

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010746231.2
• 申請(qǐng)日: 2020-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN111766125A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 車拴龍;吳濤;丁向東;李映華;丘偉松;劉斯;李東雄;董西蘭;張勝群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/31
• 分類號(hào): G01N1/31;G01N21/64
• 代理公司: 深圳中細(xì)軟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44528
• 代理人: 唐楠

本發(fā)明公開了一種利用熒光淬滅時(shí)間差進(jìn)行的染色方法，該方法包括：將組織病理切片進(jìn)行脫蠟，得到待處理切片并用帶有預(yù)設(shè)抗體的熒光染色試劑對(duì)待處理切片進(jìn)行至少一次熒光染色，得到包括預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記的熒光染色切片。在進(jìn)行下一次熒光染色之前，淬滅上一次熒光染色生成的預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記；掃描每個(gè)熒光染色切片，得到熒光圖像。淬滅預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記，用蘇木精伊紅染色法對(duì)待處理切片進(jìn)行上色染色，獲取上色染色切片，掃描上色染色切片以獲取上色圖像。將至少一個(gè)熒光圖像和上色圖像進(jìn)行圖像疊加融合處理，得到交叉復(fù)染融合圖像。因此本發(fā)明能滿足染色圖像對(duì)觀察范圍及染色特異性的要求。此外，還提出了利用熒光淬滅時(shí)間差進(jìn)行的染色裝置、設(shè)備和介質(zhì)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞染色技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及利用熒光淬滅時(shí)間差進(jìn)行的染色方法及自動(dòng)化染色裝置、設(shè)備和介質(zhì)。

背景技術(shù)

組織病理診斷是疾病診斷中重要的手段方法。組織病理診斷需依據(jù)對(duì)組織病理切片進(jìn)行染色觀察，常見的染色方法包括：HE(hematoxylin-eosin，蘇木精伊紅)染色、免疫組化染色、免疫熒光染色等方法。

常規(guī)HE染色相比于免疫熒光染色方法的觀察范圍更廣，但是對(duì)某一特定細(xì)胞或物質(zhì)，識(shí)別與分辨的能力嚴(yán)重依賴于人的經(jīng)驗(yàn)及視覺的極限能力。而免疫熒光染色方法，利用抗體技術(shù)，具備高敏感性、高特異性的放大待目標(biāo)檢測(cè)的細(xì)胞或物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，但目前免疫熒光方法存在圖像無法長(zhǎng)期保存，且使用的染色抗體較多時(shí)，容易出現(xiàn)熒光光譜之間的交叉干擾的現(xiàn)象，會(huì)影響最后的結(jié)果判讀。而直接結(jié)合免疫熒光染色與HE染色將會(huì)使染色區(qū)域無法保持完全一致，會(huì)導(dǎo)致染色觀察區(qū)域的誤判。因此，現(xiàn)有的染色方法僅可以實(shí)現(xiàn)觀察HE染色圖像或免疫熒光圖像中的1-3種抗體，缺乏綜合HE及多種抗體的分析結(jié)果圖。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要針對(duì)上述問題，提供可進(jìn)行綜合分析的利用熒光淬滅時(shí)間差進(jìn)行的染色方法及自動(dòng)化染色裝置、設(shè)備和介質(zhì)。

一種利用熒光淬滅時(shí)間差進(jìn)行的染色的方法，包括步驟：

將組織病理切片進(jìn)行脫蠟，獲取待處理切片；

用帶有預(yù)設(shè)抗體的熒光染色試劑對(duì)所述待處理切片進(jìn)行至少一次熒光染色，獲取至少一個(gè)包括預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記的熒光染色切片；其中，在進(jìn)行下一次熒光染色之前，淬滅上一次熒光染色生成的所述預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記；

掃描所述至少一個(gè)熒光染色切片，獲取至少一個(gè)包括熒光區(qū)域的熒光圖像；

淬滅所述預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記，用蘇木精伊紅染色法對(duì)所述待處理切片進(jìn)行上色染色，獲取上色染色切片，掃描所述上色染色切片以獲取上色圖像；

將所述至少一個(gè)熒光圖像和所述上色圖像進(jìn)行圖像疊加融合處理，得到交叉復(fù)染融合圖像。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述淬滅所述預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記的步驟包括：

以光強(qiáng)超過閾值的光線照射所述熒光染色切片。

在一個(gè)實(shí)施例中，所述將組織病理切片進(jìn)行脫蠟，包括：

將所述組織病理切片用二甲苯脫蠟3次，每次持續(xù)時(shí)間為3-10分鐘；

將所述組織病理切片用無水乙醇脫蠟3次，每次持續(xù)時(shí)間為3-10分鐘；

將所述組織病理切片用磷酸緩沖鹽溶液脫蠟3次，每次持續(xù)時(shí)間為3-10分鐘。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述用帶有預(yù)設(shè)抗體的熒光染色試劑對(duì)所述待處理切片進(jìn)行至少一次熒光染色，獲取至少一個(gè)包括預(yù)設(shè)熒光標(biāo)記的熒光染色切片，包括：

將帶有所述預(yù)設(shè)抗體的熒光染色試劑滴加到所述待處理切片上，將所述待處理切片放置于35-42℃的濕盒中孵育1-2小時(shí)；

用磷酸緩沖鹽溶液漂洗所述待處理切片3次，每次持續(xù)時(shí)間為3-10分鐘，獲取所述熒光染色切片；