[發明專利]利用熒光淬滅時間差進行的染色方法及自動染色裝置、設備和介質

在審

• 申請號: 202010746231.2
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111766125A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 車拴龍;吳濤;丁向東;李映華;丘偉松;劉斯;李東雄;董西蘭;張勝群
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: G01N1/31
• 分類號: G01N1/31;G01N21/64
• 代理公司: 深圳中細軟知識產權代理有限公司 44528
• 代理人: 唐楠

1.一種利用熒光淬滅時間差進行的染色的方法，其特征在于，包括步驟：

將組織病理切片進行脫蠟，獲取待處理切片；

用帶有預設抗體的熒光染色試劑對所述待處理切片進行至少一次熒光染色，獲取至少一個包括預設熒光標記的熒光染色切片；其中，在進行下一次熒光染色之前，淬滅上一次熒光染色生成的所述預設熒光標記；

掃描所述至少一個熒光染色切片，獲取至少一個包括熒光區域的熒光圖像；

淬滅所述預設熒光標記，用蘇木精伊紅染色法對所述待處理切片進行上色染色，獲取上色染色切片，掃描所述上色染色切片以獲取上色圖像；

將所述至少一個熒光圖像和所述上色圖像進行圖像疊加融合處理，得到交叉復染融合圖像。

2.權利要求1所述的方法，其特征在于，所述淬滅所述預設熒光標記的步驟包括：

以光強超過閾值的光線照射所述熒光染色切片。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述將組織病理切片進行脫蠟，包括：

將所述組織病理切片用二甲苯脫蠟3次，每次持續時間為3-10分鐘；

將所述組織病理切片用無水乙醇脫蠟3次，每次持續時間為3-10分鐘；

將所述組織病理切片用磷酸緩沖鹽溶液脫蠟3次，每次持續時間為3-10分鐘。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述用帶有預設抗體的熒光染色試劑對所述待處理切片進行至少一次熒光染色，獲取至少一個包括預設熒光標記的熒光染色切片，包括：

將帶有所述預設抗體的熒光染色試劑滴加到所述待處理切片上，將所述待處理切片放置于35-42℃的濕盒中孵育1-2小時；

用磷酸緩沖鹽溶液漂洗所述待處理切片3次，每次持續時間為3-10分鐘，獲取所述熒光染色切片；

所述掃描所述至少一個熒光染色切片，獲取至少一個包括熒光區域的熒光圖像，包括：

對所述熒光染色切片進行免疫熒光掃描，生成包括所述熒光區域的所述熒光圖像。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述用蘇木精伊紅染色法對所述待處理切片進行上色染色，獲取上色染色切片，掃描所述上色染色切片或獲取上色圖像，包括：

將所述待處理切片依次用100％無水乙醇浸泡3-10分鐘，用95％乙醇浸泡3-10分鐘，用85％乙醇浸泡3-10分鐘；

將所述待處理切片依次用蒸餾水浸泡5分鐘，用蘇木素染色5分鐘，用流水沖洗5分鐘，用1％鹽酸乙醇浸泡10-30秒，用流水沖洗1分鐘，用伊紅染色1-5分鐘，用流水沖洗1分鐘；

將所述待處理切片依次用75％乙醇浸泡3-10分鐘，用85％乙醇浸泡3-10分鐘，用95％乙醇浸泡3-10分鐘，用100％無水乙醇浸泡3-10分鐘2次；

將所述待處理切片用二甲苯浸泡2-5分鐘，用中性樹膠封片，進行數字病理掃描，生成所述上色圖像。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述將所述至少一個熒光圖像和所述上色圖像進行圖像疊加融合處理，得到交叉復染融合圖像，包括：

分別對每個所述熒光圖像中的所述熒光區域進行顏色區分處理；

將進行顏色區分處理后的所述至少一個熒光圖像與所述上色圖像進行圖像疊加融合處理，得到交叉復染融合圖像。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述組織病理切片包括：乳腺癌組織病理切片、肺癌組織病理切片、腸癌組織病理切片、病毒性肺炎組織病理切片及支原體肺炎組織病理切片。