[發(fā)明專利]靶向敲除TNFα基因的sgRNA和敲除TNFα基因的豬胚胎成纖維細(xì)胞系及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010745244.8
• 申請(qǐng)日: 2020-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN111944810B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張浩;付玉;張盼;張博;凌遙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/11;C12Q1/6888;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 錢云

1.一種靶向敲除TNFα基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的靶點(diǎn)序列為如SEQ IDNO：1所示的核苷酸序列。

2.編碼權(quán)利要求1所述sgRNA的DNA分子。

3.一種生物材料，其特征在于，所述生物材料包括權(quán)利要求1所述sgRNA，所述生物材料為載體、表達(dá)盒或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中的一種或多種。

4.一種敲除了TNFα基因的細(xì)胞系的構(gòu)建方法，其特征在于，包括：

利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)敲除所述細(xì)胞系的TNFα基因，所述CRISPR-Cas9系統(tǒng)使用的sgRNA的靶點(diǎn)序列為如SEQ ID NO：1所示的序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)敲除所述細(xì)胞系的TNFα基因中使用pX330載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述細(xì)胞系為豬胚胎成纖維細(xì)胞系。

7.一種豬胚胎成纖維細(xì)胞系，其特征在于，所述豬胚胎成纖維細(xì)胞系由權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述構(gòu)建方法構(gòu)建得到。

8.用于鑒定權(quán)利要求7所述豬胚胎成纖維細(xì)胞系的突變類型的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的引物。

9.權(quán)利要求7所述豬胚胎成纖維細(xì)胞系在制備免疫和炎癥反應(yīng)的疾病研究模型中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求7所述豬胚胎成纖維細(xì)胞系在轉(zhuǎn)基因豬制備中的應(yīng)用。