[發明專利]一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 202010743717.0
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN111856016B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 黃愛;陳婷;伍衛姣;劉道錦;鄭慧玲;趙愿安;舒芹
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 江慧

本發明公開了一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒，包括膠乳試劑，所述膠乳試劑包括第一KL?6單克隆抗體膠乳試劑和第二KL?6單克隆抗體膠乳試劑；將膠乳微球使用pH5.5～6.0的活化緩沖液活化，后調節pH值至7.0～7.4獲得第一活化微球溶液，與第一KL?6單克隆抗體偶聯獲得第一偶聯反應液；將膠乳微球使用pH6.5～7.0的活化緩沖液活化，后調節pH值至7.5～8.0獲得第二活化微球溶液，與所述第二KL?6單克隆抗體偶聯獲得第二偶聯反應液；將第一偶聯反應液和第二偶聯反應液分別封閉，后固液分離獲得的固體重懸，獲得所述第一和第二KL?6單克隆抗體膠乳試劑。該試劑盒準確度較高，線性范圍較寬，有利于放大生產。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒及其制備方法。

背景技術

近年來，隨著醫學各種檢查技術的不斷發展，尤其是肺部影像學如高分辨CT在臨床中的廣泛應用，提高了ILD患者早期診斷準確率，但ILD治療并未取得實質性進展，部分患者的預后差，死亡率高。早期診斷和治療可改善患者預后，故目前除臨床已用于ILD診斷的肺CT、肺功能、血氣分析、支氣管鏡及肺活檢等手段外，與ILD疾病發展及轉歸有關的血清學檢測亦成為研究熱點，其中涎液化糖鏈抗原-6(KL-6)被認為是比較有前景的血清學指標，目前較多研究認為KL-6與ILD病變的發生、進展、藥物療效及預后均有明顯相關性。目前在日本已經確立KL-6了診斷間質性肺炎的臨床醫學意義，使用KL-6指標診斷間質性肺炎已經得到廣泛應用。

KL-6是5000kDa以上的MUC黏蛋白中的一種糖類蛋白，在肺部，主要由Ⅱ型肺泡上皮細胞產生。KL-6對判斷Ⅱ型肺泡上皮細胞的功能具有特異性。若肺部基底膜的損害，可致血管通透性增加，使KL-6入血。血清KL-6可反映肺泡損傷，II型肺泡細胞再生和多種間質性肺疾病的活動度。KL-6水平的升高與組織的纖維化損傷程度成正比。近年的多項研究報道了KL-6高水平表達可能與間質性肺疾病(ILD)、急性肺損傷、放射性肺炎、病毒性肺炎、藥物相關性間質性肺炎、腫瘤等疾病相關聯,其作用可能是促進成纖維細胞增殖和遷徙,從而影響纖維化的發生和發展。

目前臨床上廣泛使用膠乳免疫比濁法檢測KL-6的方法有：(1)方法1：將兩株單抗先混合起來，然后一起活化偶聯；然而該種方法的準確度和精密度均不高；因為每株單抗有它自己合適的活化偶聯條件，如果兩株單抗放在同一條件下，一起活化偶聯，則不能把每株單抗最合適的性能展現出來，從而影響準確度和精密度。(2)方法2：將兩株單抗分別偶聯在大膠乳和小膠乳上來增加線性和靈敏度，該種方法使用兩株單抗偶聯大小膠乳(同一條件)雖然可以增加靈敏度和線性范圍，但是工藝里面涉及多次離心和超聲步驟，不利于放大生產。

因此，如何開發一種準確度和精密度高，同時可以省去了離心、超聲步驟，有利于放大生產的涎液化糖鏈抗原測定試劑盒及其制備方法，成為亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明目的是提供一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒，運用本發明的技術所制備的膠乳免疫比濁試劑準確度、線性均較高，且其它各項性能結果也能滿足臨床使用需求；同時省去了離心、超聲步驟，有利于放大生產。

為了實現上述目的，本發明提供了一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒，所述試劑盒包括膠乳試劑，所述膠乳試劑包括第一KL-6單克隆抗體膠乳試劑和第二KL-6單克隆抗體膠乳試劑；所述第一KL-6單克隆抗體膠乳試劑和所述第二KL-6單克隆抗體膠乳試劑的制備方法為：

獲得活化劑、pH5.5～6.0的活化緩沖液、pH6.5～7.0的活化緩沖液、第一KL-6單克隆抗體、第二KL-6單克隆抗體、pH調節液、封閉液和復溶溶液；所述pH5.5～6.0的活化緩沖液和所述pH6.5～7.0的活化緩沖液均為50mmol/L～100mmol/L硼酸緩沖液；所述pH調節液為20mmol/L～100mmol/L硼酸鈉緩沖溶液；