[發(fā)明專利]一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010743717.0 | 申請日： | 2020-07-29 |
| 公開（公告）號： | CN111856016B | 公開（公告）日： | 2023-08-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 黃愛;陳婷;伍衛(wèi)姣;劉道錦;鄭慧玲;趙愿安;舒芹 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢生之源生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京眾達德權(quán)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11570 | 代理人： | 江慧 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖開發(fā)區(qū)高*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 液化 抗原 測定 試劑盒 及其 制備 方法 | ||
1.一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述試劑盒包括膠乳試劑，所述膠乳試劑包括第一KL-6單克隆抗體膠乳試劑和第二KL-6單克隆抗體膠乳試劑；所述第一KL-6單克隆抗體膠乳試劑和所述第二KL-6單克隆抗體膠乳試劑的制備方法為：
獲得活化劑、pH5.5～6.0的活化緩沖液、pH6.5～7.0的活化緩沖液、第一KL-6單克隆抗體、第二KL-6單克隆抗體、pH調(diào)節(jié)液、封閉液和復(fù)溶溶液；所述pH5.5～6.0的活化緩沖液和所述pH6.5～7.0的活化緩沖液均為50mmol/L～100mmol/L硼酸緩沖液；所述pH調(diào)節(jié)液為20mmol/L～100mmol/L硼酸鈉緩沖溶液；
將膠乳微球使用所述活化劑和所述pH5.5～6.0的活化緩沖液活化，后使用所述pH調(diào)節(jié)液調(diào)節(jié)pH值至7.0～7.4，獲得第一活化微球溶液；將所述第一活化微球溶液與所述第一KL-6單克隆抗體混勻進行偶聯(lián)反應(yīng)，獲得第一偶聯(lián)反應(yīng)液；將所述第一偶聯(lián)反應(yīng)液使用所述封閉液封閉，后離心和/或固液分離，獲得第一固體，將所述第一固體使用所述復(fù)溶溶液重懸后混勻，獲得所述第一KL-6單克隆抗體膠乳試劑；
將膠乳微球使用所述活化劑和所述pH6.5～7.0的活化緩沖液活化，后調(diào)節(jié)pH值至7.5～8.0，獲得第二活化微球溶液；將所述第二活化微球溶液與所述第二KL-6單克隆抗體混勻進行偶聯(lián)反應(yīng)，獲得第二偶聯(lián)反應(yīng)液；將所述第二偶聯(lián)反應(yīng)液使用所述封閉液封閉，后離心和/或固液分離，獲得第二固體，將所述第二固體用所述復(fù)溶溶液重懸后混勻，獲得所述第二KL-6單克隆抗體膠乳試劑；
所述第一KL-6單克隆抗體膠乳試劑和第二KL-6單克隆抗體膠乳試劑的重量比為1：0.8～1.2；所述第一KL-6單克隆抗體的貨號為DM-KL-6mab-1，第二KL-6單克隆抗體的貨號為DM-KL-6mab-2；
所述獲得所述第一KL-6單克隆抗體膠乳試劑時，所述膠乳微球與pH5.5～6.0的活化緩沖液的體積比為1：2～4；所述獲得所述第二KL-6單克隆抗體膠乳試劑時，所述膠乳微球與pH6.5～7.0的活化緩沖液的體積比為1：2～4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述膠乳微球的粒徑為200nm～250nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述活化劑為EDC溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述封閉液包括封閉液1和封閉液2，所述封閉液1為吐溫-20，所述封閉液2為BSA。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述復(fù)溶溶液為25mmol/L～50mmol/L?HEPES，0.5g/L?EDTA-2Na，5％海藻糖，0.05％吐溫-20，0.1％PC-300，pH值為7.0～7.5。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述試劑盒還包括樣本預(yù)處理試劑，所述樣本預(yù)處理試劑包括如下的終濃度組分為：
50mmol/L～100mmol/L?2-(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES)，0.08mol/L氯化鈉，0.2％Thesit，0.1％疊氮化鈉，pH?6～8。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒的制備方法，其特征在于，所述試劑盒還包括校準試劑，所述校準試劑包括不同濃度梯度的涎液化糖鏈抗原和基質(zhì)液，所述基質(zhì)液包括磷酸鹽緩沖液，EDTA二鈉或EDTA二鉀，丙三醇，海藻糖，BSA，鹽類物質(zhì)，氯化鉀中的至少一種。
8.一種涎液化糖鏈抗原測定試劑盒，其特征在于，采用權(quán)利要求1-7任一所述的制備方法制備而得。
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