[發(fā)明專利]一類苯丙氨酸來源的細(xì)胞松弛素及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010738947.8
• 申請(qǐng)日: 2020-07-28
• 公開（公告）號(hào): CN111808015B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高坤;馬凱亮;李亞;劉珍伶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D209/96
• 分類號(hào): C07D209/96;A61P35/00;C12P17/10;C12R1/645
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 劉紅陽

本發(fā)明公開了一類苯丙氨酸來源的細(xì)胞松弛素(cytochalasins)及其制備方法和應(yīng)用。該類細(xì)胞松弛素類化合物的制備方法如下：將一株三尖杉(Cephalotaxus fortunei Hook.f)葉子中的內(nèi)生真菌Xylaria sp.CFL5接種于大米培養(yǎng)基，待其生長3周后，切碎培養(yǎng)基，并用乙酸乙酯浸泡提取，減壓濃縮得粗浸膏；該提取物用大孔樹脂、硅膠及半制備的高效液相色譜柱分離，即得該類化合物。該類化合物對(duì)LAG3與MHCⅡ的結(jié)合及LAG3與FGL1的結(jié)合具有明顯的抑制活性，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，所以該類化合物可能作為一種新型抗癌候選藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一類苯丙氨酸來源的細(xì)胞松弛素及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

植物內(nèi)生真菌因其與宿主植物長期共存，對(duì)于宿主植物的生長生存有著重要的作用，比如，保護(hù)植物免受昆蟲、食草動(dòng)物進(jìn)食，促進(jìn)植物生長，產(chǎn)生信號(hào)分子吸引昆蟲、鳥類幫助授粉等。研究表明，這些作用的存在與植物內(nèi)生真菌產(chǎn)生的天然產(chǎn)物有很大的相關(guān)性，有些內(nèi)生真菌甚至可以產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的代謝產(chǎn)物。因而對(duì)植物內(nèi)生真菌及其代謝產(chǎn)物的研究可以探尋植物與內(nèi)生真菌的協(xié)同進(jìn)化關(guān)系，同時(shí)又是一個(gè)尋找有價(jià)值的天然產(chǎn)物的重要途徑。

三尖杉(Cephalotaxus fortunei Hook.f)為我國特有樹種，隸屬于裸子植物三尖杉科(Cephalotaxaceae)三尖杉屬(Cephalotaxus)。三尖杉屬植物的主要活性成分是生物堿，如：三尖杉酯堿(harringtonin)和高三尖杉酯堿(homobarringtonie)。從該屬植物的根、樹皮、種子等部位中提取的多種生物堿被臨床證明具有抗癌作用，特別是在白血病治療方面具有較高的應(yīng)用價(jià)值，其中高三尖杉酯堿已于2012年被美國FDA批準(zhǔn)上市，用于治療慢性粒細(xì)胞白血病。雖然對(duì)三尖杉植物的化學(xué)成分已有了比較多的研究成果，但關(guān)于三尖杉內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究卻很稀少，因此有望從其內(nèi)生真菌中獲得結(jié)構(gòu)新穎活性優(yōu)良的化合物。

LAG 3(淋巴細(xì)胞活化基因3)是一種靶向腫瘤微環(huán)境內(nèi)的抑制受體，可抑制CD4和CD8 T細(xì)胞的增殖、活化、效應(yīng)功能及穩(wěn)態(tài)，但被其配體激活后，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。在很長的一段時(shí)間里，人們認(rèn)為MHCⅡ(主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ)為其典型配體。然而，MHCⅡ是否單獨(dú)負(fù)責(zé)LAG-3的抑制功能仍存在爭議。研究人員于2018年證明了FGL1是一種肝臟分泌蛋白，是一種獨(dú)立于MHCⅡ的主要LAG3功能配體。該發(fā)現(xiàn)揭示了一種免疫逃逸機(jī)制，并對(duì)癌癥免疫治療的設(shè)計(jì)具有指導(dǎo)意義。因此，開發(fā)具有抑制LAG3與MHCⅡ結(jié)合及抑制LAG3與FGL1結(jié)合的小分子抑制劑，可為癌癥免疫治療提供一個(gè)新思路，提高癌癥的治愈率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供結(jié)構(gòu)新穎的苯丙氨酸來源細(xì)胞松弛素類化合物,本發(fā)明化合物Xylariasin A(Xs-1)、12-Hydroxyl zygosporin G(Xs-2)、Cytochalasin C(Xs-3)、6,7-Dihydro-7-oxo-cytochalasin C(Xs-4)和Zygosporin E(Xs-5)，其中化合物Xs-1是一個(gè)首次報(bào)道的新化合物，這些化合物結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)所示：

本發(fā)明的目的之二是提供制備一類苯丙氨酸來源的細(xì)胞松弛素衍生物的方法，其特征在于，該類化合物是從三尖杉葉子內(nèi)生真菌Xylaria sp.CFL5發(fā)酵提取物中獲得的，具體在于將真菌Xylaria sp.CFL5接種于大米培養(yǎng)基，待其生長3周后，切碎培養(yǎng)基，并用乙酸乙酯浸泡提取，減壓濃縮得粗浸膏；該提取物用大孔樹脂、硅膠及半制備的高效液相色譜柱分離，即得該類化合物。

包括以下步驟：

S1、將真菌Xylaria sp.CFL5接種于YMG培養(yǎng)基，140rpm，28℃培養(yǎng)5天，得到種子液。之后將其按每瓶10mL接種量加入大米培養(yǎng)基，于28℃恒溫培養(yǎng)3周。

S2、待發(fā)酵結(jié)束，切碎大米培養(yǎng)基。使用EtOAc室溫浸提5次，減壓蒸餾除去溶劑，從而獲得粗浸膏。