[發明專利]一類苯丙氨酸來源的細胞松弛素及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010738947.8
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111808015B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 高坤;馬凱亮;李亞;劉珍伶
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C07D209/96
• 分類號: C07D209/96;A61P35/00;C12P17/10;C12R1/645
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 劉紅陽

1.一種如式(Ⅰ)所述化合物的制備方法，

所述制備步驟如下：

S1、將真菌三尖杉葉子內生真菌接種于YMG培養基，140rpm，28℃培養5天，得到種子液；之后將其按每瓶10mL接種量加入大米培養基，于28℃恒溫培養3周；

S2、待發酵結束，切碎培養基；使用EtOAc室溫浸提5次，減壓蒸餾除去溶劑，從而獲得粗浸膏；

S3、使用大孔樹脂對該粗浸膏進行分段，用30％,50％,80％,95％EtOH作為流動相梯度洗脫，獲得4個組分Fr.1–4，依次對應為30％,50％,80％,95％EtOH洗脫相；

S4、Fr.3使用正相硅膠柱進行分段，流動相為石油醚/乙酸乙酯的混合溶劑梯度洗脫，體積比依次為10:1，5:1，2:1，1:1，1:2，通過TLC檢測，將相似的樣品進行合并，得到7個組分Fr.3A–3G，Fr.3A對應10：1，Fr.3B對應5：1，Fr.3C和Fr.3D對應2：1，Fr.3E對應1：1，Fr.3F對應1：2，Fr.3G對應樣品部位；

S5、Fr.3B使用HPLC，其中MeCN/H₂O＝7:3,v/v；進行分離，得到了化合物Xs-1(XylariasinA)，t_R＝30min；

S6、使用高效液相純化Fr.3E的過程中，即MeCN/H₂O＝23:17,v/v，得到了化合物Xs-4(6,7-Dihydro-7-oxo-cytochalasin C)，t_R＝50min；Xs-3(Cytochalasin C)，t_R＝60min；

S7、化合物Xs-2(12-Hydroxyl zygosporin G)，t_R＝18min；Xs-5(Zygosporin E)，t_R＝32min；在使用高效液相純化Fr.3F的過程中MeCN/H₂O＝101:99,v/v獲得。

2.根據權利要求1所述的一種如式(Ⅰ)所述化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，YMG培養基的制備方法為：酵母提取物4g,麥芽提取物10g，葡萄糖10g，蒸餾水1L，121℃滅菌30min，放冷即得。

3.根據權利要求1所述的一種如式(Ⅰ)所述化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，大米培養基的制備方法為：稱取80g大米于1L錐形瓶中，加入4g蔗糖，120mL蒸餾水，封口于121℃滅菌30min，放冷即得。

4.根據權利要求3所述的一種如式(Ⅰ)所述化合物的制備方法，其特征在于，所述S5、S6、S7中半制備液相色譜的液相色譜儀為Waters 1525，流動相為乙腈-水或甲醇-水，流速為2mL/min，檢測器為Waters 2998光電二極管陣列檢測器，檢測波長為200-400nm，色譜柱為Waters Sunfire C18半制備柱，規格為10×250mm。