[發(fā)明專利]一種干血斑中四種維生素的檢測方法及檢測試劑盒

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• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111983244A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李艷;周傳貴;周玉松;李艷杰;胡瑋;韓文念;徐振;程文播
• 申請（專利權(quán)）人: 天津國科醫(yī)工科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N33/82
• 分類號: G01N33/82;G01N30/02
• 代理公司: 天津企興智財知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12226
• 代理人: 王雨杰

本發(fā)明創(chuàng)造提供了一種干血斑中四種維生素的檢測方法及檢測試劑盒，包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)混合液、第一提取液、第二提取液、復(fù)溶液、流動相A、流動相B和洗針液。本發(fā)明所述的一種干血斑中四種維生素的檢測方法及檢測試劑盒，能夠提供校準(zhǔn)品、樣品前處理所涉及的試劑和質(zhì)控品，免除實驗室檢測自配的繁瑣步驟和造成的誤差，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明創(chuàng)造屬于臨床體外檢測試劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種干血斑中四種維生素的檢測方法及檢測試劑盒。

背景技術(shù)

維生素是機體維持正常代謝和機能所必需的一類小分子化合物，是人體必需的營養(yǎng)要素，主要調(diào)節(jié)體內(nèi)各種代謝過程和生理活動。大多數(shù)維生素必須從食物中獲得，僅少數(shù)可在體內(nèi)合成或由腸道細(xì)菌產(chǎn)生。在人體內(nèi)含量少，但生理作用很大，攝入量不足或過量都會引發(fā)相應(yīng)的疾病。

維生素A是生長發(fā)育、細(xì)胞識別、視覺、免疫功能和繁殖所必需的必需維生素，還可以幫助心臟、肺、腎臟和其他器官正常運行。維生素D水平對調(diào)節(jié)鈣、磷代謝至關(guān)重要，缺乏可能會導(dǎo)致兒童佝僂病、成人骨質(zhì)疏松癥、軟骨癥、肌無力，增加老人跌倒骨折風(fēng)險。近期研究表明，維生素D缺乏還與心血管疾病、自身免疫性疾病、糖尿病以及腫瘤等疾病有關(guān)。維生素E有抗氧化的生物作用，不僅可以防止細(xì)胞膜上脂類過氧化，也可以終止自由基鏈反應(yīng)，對動物生長、骨骼及視力發(fā)育、繁殖和免疫功能有著尤為重要的影響，同時在身體退行性病變，癌癥以及心血管等疾病方面也有一定的預(yù)防作用。

臨床檢測維生素的方法有有紫外可見分光光度法、酶聯(lián)免疫吸附法、高效液相色譜法等，免疫法可實現(xiàn)自動化操作，檢測快速、成本低，但單次僅能檢測一種分析物，特異性差、易出現(xiàn)交叉反應(yīng)，紫外可見分光光度法和高效液相色譜法所需樣本量較大，靈敏度較低等無法滿足檢測需求。隨著技術(shù)的發(fā)展，以色譜作為分離手段、三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜作為檢測手段的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)成為了定量檢測生物樣品中痕量目標(biāo)分析物的強有力的手段。現(xiàn)有的基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測血清中維生素的定量檢測方法多為實驗室自建方法，由于每個實驗室檢測方法和試劑選擇不同，會造成室間的檢測結(jié)果差異大，特別是在面對臨床大量的檢測樣本，很難保證檢測結(jié)果的一致性。想要解決這些問題，就需要針對檢測項目直接提供經(jīng)過驗證的配套試劑盒以及標(biāo)準(zhǔn)的檢測流程，提高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在臨床檢測的推廣性，保證檢測結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性。

此外，在檢測過程中，干血斑具備采血量少、制備操作簡單、生物危險性低、生物穩(wěn)定性好、運輸保存方便等優(yōu)勢，可以更好地應(yīng)用于臨床，不僅減少了對樣本量的需求，降低了患者的生理負(fù)擔(dān)，而且便于異地檢測，檢測精準(zhǔn)。而目前基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進行干血斑中維生素A、D、E的檢測方法及檢測試劑盒鮮有報道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明創(chuàng)造旨在提出一種干血斑中四種維生素的檢測方法及檢測試劑盒，以克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，能夠提供校準(zhǔn)品、樣品前處理所涉及的試劑和質(zhì)控品，免除實驗室檢測自配的繁瑣步驟和造成的誤差，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明創(chuàng)造的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：

一種干血斑中四種維生素的檢測方法及檢測試劑盒，包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)混合液、第一提取液、第二提取液、復(fù)溶液、流動相A、流動相B和洗針液；所述內(nèi)標(biāo)混合液為氘代維生素A、氘代25羥基維生素D2、氘代25羥基維生素D3和氘代維生素E。

進一步的，所述校準(zhǔn)品為含有梯度濃度維生素A、D、E的干血斑，所述校準(zhǔn)品的制備方法為：先用甲醇稀釋維生素A、D、E標(biāo)品溶劑到梯度濃度，然后與全血混合均勻，滴加到干血斑晾干封裝；所述校準(zhǔn)品中維生素A的濃度范圍為50-2000ng/mL，25羥基維生素D2濃度范圍為5-40ng/mL，25羥基維生素D3濃度范圍為5-200ng/mL，維生素E的濃度范圍1-40μg/mL。