[發明專利]一種吡嘧磺隆水解酶基因pyfE及其編碼的蛋白與應用

在審

• 申請號: 202010737689.1
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN112980855A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 張浩;李娜;韋宇平;柳成賓;王鵬;陳兆進;韓輝;滑紫微
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/14;C12N15/66;C12N15/70;C12N1/21;B09C1/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 夏晏平

1.一種吡嘧磺隆水解酶基因pyfE，其特征在于，用于編碼吡嘧磺隆水解酶蛋白，所述水解酶基因pyfE的核苷酸序列為序列表中SEQ ID NO.1。

2.一種吡嘧磺隆水解酶蛋白PyfE，其特征在于，所述吡嘧磺隆水解酶蛋白的氨基酸序列為序列表中SEQ ID NO.2。

3.權利要求1中吡嘧磺隆水解酶基因pyfE的表達載體pET29a-pyfE的構建，其特征在于，包括以下步驟：

S1：設計一對用于水解酶基因pyfE核酸序列的特異性引物，正向引物引入了NdeⅠ酶切位點，反向引物引入了HindⅢ酶切位點；

S2：通過PCR擴增含有酶切位點的pyfE基因，所述pyfE基因不含有終止密碼子；

S3：將S2的PCR產物用限制性核酸內切酶NdeⅠ和HindⅢ雙酶切，并用凝膠回收試劑盒純化；

S4：將S3的產物與經過同樣雙酶切處理的pET29a載體通過T4 DNA連接酶連接，從而獲得重組表達載體pET29a-pyfE。

4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于，所述特異性引物為，

正向引物：

S-F:5’-CTGATTGCATATGGAAACTGACAACGTGGAGCT-3’；

反向引物：

S-R:5’-TACAAGCTTGCTTTCGTTCTGATCTAAGC-3’。

5.含有權利要求1所述的吡嘧磺隆降解基因pyfE的基因工程菌，其特征在于，將所述的表達載體pET29a-pyfE導入表達菌株Escherichia coli BL21(DE3)。

6.權利要求2所述吡嘧磺隆水解酶PyfE在降解吡嘧磺隆中的應用。

7.權利要求2所述吡嘧磺隆水解酶PyfE在去除土壤中吡嘧磺隆的應用。