[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于體外擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010736863.0
• 申請(qǐng)日: 2020-07-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111849883A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鵬東;鐘祥鳳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 李鵬東;鐘祥鳳
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0775
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 董大媛

本發(fā)明提供了一種用于體外擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法，屬于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。用于體外擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基，以DMEM/F?12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包含以下含量的組分：體積百分含量4～6％自體血清、9～11ng/ml bFGF和0.8～1.2％青霉素?鏈霉素。本發(fā)明用人自體血清，作為添加物制備擴(kuò)增培養(yǎng)基，進(jìn)行體外大量擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法。該方法培養(yǎng)的毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞與傳統(tǒng)的間充質(zhì)干細(xì)胞相比，不需要添加其他動(dòng)物血清或異體血液制品，安全性高，無(wú)同種異體疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)，細(xì)胞增殖速率高，多次傳代仍能保持間充干細(xì)胞的特性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于體外擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)及其移植技術(shù)的建立，為傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)上認(rèn)為是“不治之癥”的疾病的治療帶來(lái)了新的生機(jī)和希望。干細(xì)胞在醫(yī)學(xué)美容及抗衰等方面也發(fā)揮著巨大的作用。多種來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞是目前應(yīng)用最為廣泛的、最安全的干細(xì)胞。來(lái)源于毛囊的間充質(zhì)干細(xì)胞被認(rèn)為目前較為理想的干細(xì)胞，具有如下優(yōu)勢(shì)：1)安全性高，無(wú)致瘤性，每個(gè)人都可以保存自己的毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞，保存后需要時(shí)仍用于自體，無(wú)疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)，是一個(gè)自身的健康和生命的儲(chǔ)備；2)來(lái)源豐富，機(jī)體沒(méi)有任何一個(gè)組織比毛囊豐富，人的頭皮存在有約百萬(wàn)個(gè)毛囊，身體其他部位也存在較多毛囊；3)無(wú)年齡限制，上至八十高齡的老人，下至胎兒，在任何年齡段都可以獲得屬于自己毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞；4)取材無(wú)創(chuàng)，且可重復(fù)取材，拔取數(shù)十根毛發(fā)即可獲得，對(duì)患者來(lái)說(shuō)無(wú)任何痛苦；5)增殖和分化能力強(qiáng)，在體外短期內(nèi)就可獲得大量毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞，且仍能保持間充質(zhì)干細(xì)胞的特性，可分化為骨、軟骨、神經(jīng)、脂肪、肌肉及等多種功能細(xì)胞，并具有免疫調(diào)節(jié)功能。

傳統(tǒng)培養(yǎng)自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞主要是胎牛血清或者異體的人血小板裂解物，在培養(yǎng)過(guò)程中都會(huì)帶來(lái)大量異源或者異體的物質(zhì)，這給自體毛囊間充質(zhì)干細(xì)在臨床上應(yīng)用帶來(lái)很大安全隱患。臨床應(yīng)用自體毛囊間充質(zhì)培養(yǎng)中的動(dòng)物成分的加入會(huì)使得各種動(dòng)物病毒、支原體、軟病毒傳染至人體內(nèi)，這就是使體外培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)用于人體時(shí)存在著未知的潛在風(fēng)險(xiǎn)。而且異體的人血清的加入會(huì)帶來(lái)諸如乙肝、結(jié)核、梅毒等傳染性疾病的交叉?zhèn)鞑ァＭ瑫r(shí)，微量異源性蛋白進(jìn)入人體后就會(huì)引起強(qiáng)烈的過(guò)敏反應(yīng)，甚至?xí)＜吧?/p>

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種高效、安全的用于體外擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法。

本發(fā)明提供了一種用于體外擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基，以DMEM/F-12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包含以下含量的組分：體積百分含量4～6％自體血清、9～11ng/ml bFGF和0.8～1.2％青霉素-鏈霉素。

優(yōu)選的，以DMEM/F-12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包含以下含量的組分：體積百分含量5％自體血清、10ng/ml bFGF和1％青霉素-鏈霉素。

優(yōu)選的，所述自體血清的制備方法，將自體靜脈血經(jīng)冷藏靜置，將靜置后的全血進(jìn)行離心，收集的上清液進(jìn)行微濾得到自體血清。

優(yōu)選的，所述離心的轉(zhuǎn)速為2800～3200rpm；所述離心的時(shí)間為13～17min；所述離心的溫度優(yōu)選為3～6℃。

優(yōu)選的，所述冷藏的溫度為4℃，所述靜置的時(shí)間為1～1.5h；

所述微濾時(shí)，采用的微濾器的濾膜孔徑為0.22μm。

本發(fā)明提供了一種體外擴(kuò)增自體人毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：

1)將自體毛囊在毛囊培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，獲得自體毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞；

所述毛囊培養(yǎng)基是以DMEM/F-12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包含體積百分含量的5％自體血清和1％青霉素-鏈霉素；

2)將步驟1)中所述自體毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞在所述培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，得到自體毛囊間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)。