[發明專利]一種用于體外擴增自體人毛囊間充質干細胞培養基及其培養方法在審
| 申請號: | 202010736863.0 | 申請日: | 2020-07-28 |
| 公開(公告)號: | CN111849883A | 公開(公告)日: | 2020-10-30 |
| 發明(設計)人: | 李鵬東;鐘祥鳳 | 申請(專利權)人: | 李鵬東;鐘祥鳳 |
| 主分類號: | C12N5/0775 | 分類號: | C12N5/0775 |
| 代理公司: | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人: | 董大媛 |
| 地址: | 130012 *** | 國省代碼: | 吉林;22 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 用于 體外 擴增 毛囊 間充質 干細胞 培養基 及其 培養 方法 | ||
1.一種用于體外擴增自體人毛囊間充質干細胞的培養基,其特征在于,以DMEM/F-12為基礎培養基,包含以下含量的組分:體積百分含量4~6%自體血清、9~11ng/mlbFGF和0.8~1.2%青霉素-鏈霉素。
2.根據權利要求1所述用于體外擴增自體人毛囊間充質干細胞的培養基,其特征在于,以DMEM/F-12為基礎培養基,包含以下含量的組分:體積百分含量5%自體血清、10ng/mlbFGF和1%青霉素-鏈霉素。
3.根據權利要求1或2所述用于體外擴增自體人毛囊間充質干細胞的培養基,其特征在于,所述自體血清的制備方法,將自體靜脈血經冷藏靜置,將靜置后的全血進行離心,收集的上清液進行微濾得到自體血清。
4.根據權利要求3所述用于體外擴增自體人毛囊間充質干細胞的培養基,其特征在于,所述離心的轉速為2800~3200rpm;所述離心的時間為13~17min,所述離心的溫度為3~6℃。
5.根據權利要求3所述用于體外擴增自體人毛囊間充質干細胞的培養基,其特征在于,所述冷藏的溫度為4℃,所述靜置的時間為1~1.5h;
所述微濾時,采用的微濾器的濾膜孔徑為0.22μm。
6.一種體外擴增自體人毛囊間充質干細胞培養的方法,其特征在于,包括以下步驟:
1)將自體毛囊在毛囊培養基中預培養,獲得自體毛囊間充質干細胞;
所述毛囊培養基是以DMEM/F-12培養基為基礎培養基,包含體積百分含量的5%自體血清和1%青霉素-鏈霉素;
2)將步驟1)中所述自體毛囊間充質干細胞在權利要求1~5任意一項所述培養基中進行擴增培養,得到自體毛囊間充質干細胞庫。
7.根據權利要求6所述方法,其特征在于,步驟1)中所述預培養或步驟2)中所述擴增培養的培養溫度為36~38℃,所述培養時間為7~14d。
8.根據權利要求6或7所述方法,其特征在于,步驟1)中所述自體毛囊的獲取方法采用FUE方式進行,采用毛囊獲取儀對單個毛囊單位進行游離提取,單個毛囊在無菌條件下分離、培養,獲取毛囊間充質干細胞。
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