[發(fā)明專利]一種測定大黃醛中雜質(zhì)丹蒽醌和大黃素的分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010733950.0
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111624284B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳云;龔玉霞;金桂花;闞蘇立;朱旨昂
• 申請（專利權(quán)）人: 南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務平臺有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 蔣真

本發(fā)明為采用LC?MS/MS測定大黃醛中雜質(zhì)丹蒽醌與大黃素的分析方法，具體涉及一種測定大黃醛中雜質(zhì)丹蒽醌和大黃素的分析方法，包括如下步驟：步驟（1）確定離子源：步驟（2）確定母離子：步驟（4）確定質(zhì)譜方法：步驟（5）確定液相方法。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明采用LC?MS/MS測定大黃醛中大黃素與丹蒽醌，對照品濃度可達到75ng/ml，當檢測限為15ppm時，樣品濃度為5mg/ml，此時樣品響應較好，峰型較好。同時，PICs子離子確認掃描可以排除假陽性的干擾。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明為采用LC-MS/MS測定大黃醛中雜質(zhì)丹蒽醌與大黃素的分析方法，具體涉及一種測定大黃醛中雜質(zhì)丹蒽醌和大黃素的分析方法，本發(fā)明涉及LC-MS/MS的運用、相關(guān)質(zhì)譜條件的優(yōu)化及液相色譜條件的優(yōu)化。

背景技術(shù)

LC-MS/MS為三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，第一級和第三級四極桿分析器分別為MS1和MS2，第二級四極桿分析器所起作用是將從MS1得到的各個峰進行轟擊，實現(xiàn)母離子碎裂后進入MS2再行分析。MS/MS最基本的功能主要是MS1中的母離子和MS2中的子離子間的聯(lián)系。根據(jù)MS1和MS2的掃描模式，如子離子掃描、母離子掃描和中性碎片丟失掃描，可以查明不同質(zhì)量數(shù)離子間的關(guān)系。MS/MS在混合物分析中有很多優(yōu)勢。在質(zhì)譜與氣相色譜或液相色譜聯(lián)用時，即使色譜未能將物質(zhì)完全分離，也可以進行鑒定。MS/MS可從樣品中選擇母離子進行分析，而不受其他物質(zhì)干擾。MS/MS在藥物領(lǐng)域有很多應用。子離子掃描可獲得藥物主要成分、雜質(zhì)和其他物質(zhì)的母離子的定性信息，有助于未知物的鑒別，也可用于肽和蛋白質(zhì)氨基酸序列的鑒別。在藥物代謝動力學研究中，對生物復雜基質(zhì)中低濃度樣品進行定量分析，可用多反應監(jiān)測模式(multiple reaction monitoring，MRM)消除干擾。如分析藥物中某特定離子，而來自基質(zhì)中其他化合物的信號可能會掩蓋檢測信號，用MS1/MS2對特定離子的碎片進行選擇監(jiān)測可以消除干擾。MRM也可同時定量分析多個化合物。在藥物代謝研究中，為發(fā)現(xiàn)與代謝前物質(zhì)具有相同結(jié)構(gòu)特征的分子，使用中性碎片丟失掃描能找到所有丟失同種功能團的離子，如羧酸丟失中性二氧化碳。如果丟失的碎片是離子形式，則母離子掃描能找到所有丟失這種碎片的離子。

質(zhì)譜儀一般由四部分組成：進樣系統(tǒng)——按電離方式的需要，將樣品送入離子源的適當部位；離子源——用來使樣品分子電離生成離子，并使生成的離子會聚成有一定能量和幾何形狀的離子束；質(zhì)量分析器——利用電磁場(包括磁場、磁場和電場的組合、高頻電場、和高頻脈沖電場等)的作用將來自離子源的離子束中不同質(zhì)荷比的離子按空間位置，時間先后或運動軌道穩(wěn)定與否等形式進行分離；檢測器——用來接受、檢測和記錄被分離后的離子信號。一般情況下，進樣系統(tǒng)將待測物在不破壞系統(tǒng)真空的情況下導入離子源，離子化后由質(zhì)量分析器分離再檢測；計算機系統(tǒng)對儀器進行控制、采集和處理數(shù)據(jù)。

本實驗現(xiàn)有設(shè)備QTRAP 6500plus LC-MS/MS及QTRAP 6500LC-MS/MS，其具有兩個離子源，大氣壓離子源(APCI)和電噴霧離子源(ESI)，ESI源分析離子型/極性化合物、難揮發(fā)或熱不穩(wěn)定性化合物；APCI源分析一定揮發(fā)性的中等極性或低極性的小分子化合物。同時QTRAP 6500還具有兩個分析器，即四級桿分析器和離子阱分析器，四極桿分析器對選擇離子分析具有較高的靈敏度。離子阱在全掃描模式下仍然具有較高靈敏度，而且單個離子阱通過時間序列的設(shè)定就可以實現(xiàn)多級質(zhì)譜(MSn)的功能。

大黃素與丹蒽醌均屬于蒽醌類化合物，對癌細胞均有抑制作用，目前規(guī)定了大黃素標準為液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定法，丹蒽醌目前沒有規(guī)定，而蒽醌類化合物大多采用液質(zhì)聯(lián)用儀進行測定。

采用液質(zhì)聯(lián)用儀測定蒽醌類化合物，物質(zhì)響應偏低且殘留嚴重，檢測時需要提高樣品濃度從而導致樣品嚴重浪費，且殘留嚴重造成效率低，存在需要清洗儀器、重復檢測的問題。同時，液質(zhì)聯(lián)用儀檢測樣品時，碎片較少，定性信息少，容易產(chǎn)生假陽性的問題。

發(fā)明內(nèi)容