[發明專利]一種測定大黃醛中雜質丹蒽醌和大黃素的分析方法

有效

• 申請號: 202010733950.0
• 申請日: 2020-07-28
• 公開（公告）號: CN111624284B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 陳云;龔玉霞;金桂花;闞蘇立;朱旨昂
• 申請（專利權）人: 南京江北新區生物醫藥公共服務平臺有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 蔣真

1.一種測定大黃醛中雜質丹蒽醌和大黃素的分析方法，其特征是包括如下步驟：

步驟(1)確定離子源：采用QTRAP 6500plus LC-MS/MS型設備，其離子源有ESI源及APCI源，根據大黃素與丹蒽醌的性質，最終確定ESI源進行采集；

步驟(2)確定母離子：取高濃度大黃素、丹蒽醌單標溶液，分別采用針泵直流進樣的方式對標準品進行電離，設置Survey Scan為正模式，找到相對應的母離子，正模式無法找到母離子的情況下切換為負模式，重復上述操作；

步驟(3)確定子離子：根據采集到的大黃素、丹蒽醌母離子信息，分別設置掃描范圍進行電離，通過增大CE值，找到具有代表性的三個子離子作為定性、定量離子；

步驟(4)確定質譜方法：根據大黃素、丹蒽醌母離子、子離子信息，分別進行質譜參數的優化，包括Daughter ion、CE、eV值；

步驟(5)確定液相方法：根據質譜方法，進行液相條件的優化，包括流動相、色譜柱、洗脫過程、流速、柱溫及進樣體積，最終保證空白溶劑、對照品和樣品都沒有干擾，且兩個峰分離度大于1.5；

所述步驟(1)具體包括如下步驟：首先設置質譜參數為：離子源為正極ESI，檢測方式為多反應監測方式，質譜條件具體為：噴霧電壓5500V，離子源溫度550℃，Curtain Gas25psi，Ion Source Gas1 50psi，Ion Source Gas2 60psi，駐留時間100msec；其它MRM如下；

成分1：丹蒽醌，Parent ion值241，Daughter ion值139的時候，對應的CE值47.9eV，Daughter ion值167的時候，對應的CE值46.5eV，Daughter ion值121的時候，對應的CE值38eV，定量離子139；

成分2：大黃素 ，Parent ion值271，Daughter ion值197的時候，對應的CE值43eV，Daughter ion值225的時候，對應的CE值37.8eV，Daughter ion值169的時候，對應的CE值45eV，定量離子197；

所述步驟(5)具體包括如下步驟：配制流動相，流動相：A為0.1％甲酸，B為乙腈，超聲過濾之后，備用；色譜柱為Poroshell 120EC-C18 4.6*150mm,4 μm，連接儀器之后，梯度洗脫為0～9.0min，50％～70％流動相B，9.0～14.0min，70％流動相B，14.0～14.1min，70％～50％流動相B，14.1～20.0min，50％流動相B，流速設置為0.7ml/min；柱溫35℃；進樣體積：25μl。

2.根據權利要求1所述的測定大黃醛中雜質丹蒽醌和大黃素的分析方法，其特征是所述步驟(5)之后還包括如下步驟：

取大黃素50.0mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加乙腈溶解超聲3min，稀釋至刻度，為樣品溶液；

精密稱取5.0mg丹蒽醌至10ml容量瓶中，加乙腈溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液1-1；精密稱取5.0mg大黃素至10ml容量瓶中，加乙腈溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液1-2；

精密移取1.0ml儲備液1-1、儲備液1-2至10ml容量瓶中，加乙腈溶解后，稀釋至刻度，搖勻；作為儲備液2；

精密移取1.0ml儲備液2至10ml容量瓶中，加乙腈溶解后，稀釋至刻度，搖勻；作為儲備液3；

精密移取300μl儲備液3至10ml容量瓶中，加乙腈溶解后，稀釋至刻度，搖勻；作為儲備液4；

精密移取150μl儲備液3到10ml容量瓶，用乙腈稀釋并稀釋至刻度，即為對照品溶液；

取大黃醛約50.0mg，精密稱定，于10ml容量瓶中，精確量取150μl儲備液3與此容量瓶中，用乙腈溶解超聲3min，定容至刻度；過0.22μm的濾膜，作為樣品加標溶液；

精密量取空白溶液、樣品溶液、對照品溶液及對照品加標溶液各25μl，分別注入液相質譜聯用儀，記錄色譜圖。