[發明專利]一種ACE2抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法

在審

• 申請號: 202010733503.5
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN111808199A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 黃威權;田超;趙鋒;李丹;黃曉文;歐陽森
• 申請（專利權）人: 西安咸輔生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C07K16/02;C07K16/28;C07K16/40;C07K16/06;A61K39/395;A61P31/14
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 張曉冬

1.一種ACE2抗獨特型卵黃抗體疫苗的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

將ACE2蛋白溶液與弗氏不完全佐劑等體積混合均勻，獲得第一混合溶液；

采用所述第一混合溶液制備抗ACE2抗體；

用PBS緩沖液將0.2mL所述抗ACE2抗體稀釋成5mL后，與弗氏不完全佐劑等體積混合，獲得濃度為第一濃度的第二混合溶液；

用所述第二混合溶液肌肉注射產蛋雞，對所述產蛋雞按照第一預定條件進行第一預定次數的第一免疫；

判斷所述產蛋雞是否為高免雞；

若為高免雞，最后一次進行所述第一免疫后第三天開始采集高免雞蛋，連續采集20天；其中，所述高免雞蛋為所述高免雞生產的雞蛋；

對所述高免雞蛋進行清洗、消毒、卵黃分離、卵黃組織破碎后，獲得第一卵黃溶液；

用水稀釋和酸化法去除所述第一卵黃溶液中的雜質蛋白，獲得ACE2抗獨特型卵黃抗體粗制品；

用酒精沉淀法對所述抗獨特型卵黃抗體粗制品進行純化，獲得ACE2抗獨特型卵黃抗體精制品；

將所述ACE2抗獨特型卵黃抗體精制品制成ACE2抗獨特型卵黃抗體疫苗。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述第一濃度為每毫升所述第二混合溶液中含100μg所述抗ACE2抗體。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述第一預定條件為每只所述產蛋雞每次所述第一免疫注射0.5mL所述第二混合溶液，每隔7-10天進行一次所述第一免疫；

所述第一預定次數為3-4次。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述判斷所述產蛋雞是否為高免雞，具體為：

最后一次進行所述第一免疫后當天，采集所述產蛋雞生產的雞蛋，判斷所述雞蛋的卵黃是否含有ACE2抗獨特型卵黃抗體；

如果含有所述ACE2抗獨特型卵黃抗體，判斷所述ACE2抗獨特型卵黃抗體的效價是否大于等于10^-4；

如果所述ACE2抗獨特型卵黃抗體的效價大于等于10^-4，則所述產蛋雞為高免雞。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述采集高免雞蛋還包括：

若需繼續采集所述高免雞蛋，則對所述高免雞追加一次所述第一免疫；

連續采集所述高免雞蛋20天。

6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述用水稀釋和酸化法去除所述第一卵黃溶液中的雜質蛋白，具體為：

將第一體積的無菌蒸餾水加入到第二體積的所述第一卵黃溶液中攪拌均勻，獲得第二卵黃溶液；其中，所述第一體積等于15-35倍的所述第二體積；

用鹽酸和氫氧化鈉溶液將所述第二卵黃溶液的pH值調至5.2-6.0，使所述第二卵黃溶液產生渾濁沉淀；

在4-8℃條件下，將所述第二卵黃溶液靜置14-18小時后，取上部清液，獲得第一清液；

將底部渾濁液進行第一離心處理后，取上部清液，獲得第二清液；

將所述第一清液、所述第二清液進行混合，獲得第三清液；

用0.4μm的微孔濾膜對所述第三清液進行過濾。