[發明專利]制備CRX突變相關視網膜病變非人哺乳動物模型的方法在審

申請號：	202010732121.0	申請日：	2020-07-27
公開（公告）號：	CN111979267A	公開（公告）日：	2020-11-24
發明（設計）人：	汪楓樺	申請（專利權）人：	上海朗昇生物科技有限公司
主分類號：	C12N15/864	分類號：	C12N15/864;A01K67/027;A61K49/00
代理公司：	廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224	代理人：	林青中
地址：	200030 上海***	國省代碼：	上海;31
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搜索關鍵詞：	制備 crx 突變相關視網膜病變非人哺乳動物模型方法
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【說明書】：

本發明涉及分子生物學與生物醫學領域，具體而言，涉及一種制備CRX突變相關視網膜病變非人哺乳動物模型的方法。該方法包括采用轉基因方法使得所述動物的視網膜感光細胞中表達CRX^[S204fs]蛋白的步驟。由于CRX^[S204fs]蛋白對野生型蛋白具有競爭拮抗作用(Ⅲ類突變)，因而只要在動物體內表達CRX^[S204fs]蛋白即可表現出視網膜病變癥狀，從而不需要敲除野生型的CRX基因，使得動物模型的構建更加簡單、快速、經濟。

技術領域

本發明涉及分子生物學與生物醫學領域，具體而言，涉及一種制備CRX突變相關視網膜病變非人哺乳動物模型的方法。

背景技術

錐-桿細胞同源盒基因(cone-rod homeobox，CRX)編碼感光細胞特異性轉錄因子，可轉錄激活視紫紅質、視黃醇結合蛋白等多種感光細胞特異性基因，對視錐、視桿細胞的分化發育和完整性具有至關重要的作用。CRX是遺傳性視網膜病變常見的致病基因，其突變可引起多種疾病，包括如Leber氏先天性黑朦，視錐視桿細胞營養不良(cone-rod dystrophy，CoRD)，視錐細胞營養不良，視網膜色素變性和黃斑營養不良。大約三分之一的CRX致病性突變會導致CORD，其特征是進行性視錐細胞功能障礙，主要表現為中心視力喪失，色覺異常和視神經功能減退。隨著疾病進展逐漸累及視桿細胞，出現夜盲、周邊視野缺損等癥狀。發明人明確了一個由CRX基因c.611delC(p.S204fs)突變引起的常染色體顯性視錐視桿細胞營養不良家系。

CRX突變引起視網膜病變的致病機制尚未闡明。目前，CRX突變根據位點、突變類型和分子功能可分為四類。已有文獻通過體內外實驗探究CRX不同突變類型的致病機理。體外實驗由于無法模擬體內的轉錄調控網絡而受到限制。體內實驗主要包括攜帶CRX突變的轉基因動物模型，例如CRX^E168d2小鼠和CRX^Rdy家貓代表Ⅲ類突變，CRX^R90W小鼠代表Ⅰ類突變。但是，建立攜帶特定致病性突變位點的動物模型成本高昂、技術難度大，不能應用于所有突變位點。

發明內容

本發明的目的是針對現有CRX突變相關視網膜病變動物模型的局限性，提供一種在非人哺乳動物中建立誘導周期短、誘發率高、操作簡單方便、技術難度小的CRX突變相關視網膜病變動物模型的方法。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

制備CRX突變相關視網膜病變非人哺乳動物模型的方法，其包括采用轉基因方法使得所述動物的視網膜感光細胞中表達CRX^[S204fs]蛋白的步驟。

可選的，如上所述的方法，所述轉基因方法包括將含有c.611delC突變的CRX基因轉染到所述動物的視網膜感光細胞。

可選的，如上所述的方法，所述突變的CRX基因被連接于載體中，通過所述載體轉染到所述動物的視網膜感光細胞。

可選的，如上所述的方法，所述CRX基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

可選的，如上所述的方法，所述載體為AAV載體。

可選的，如上所述的方法，所述載體含有編碼報告基因和/或標簽蛋白的核苷酸。

可選的，如上所述的方法，所述載體通過視網膜下腔注射以將所述突變的CRX基因轉染到所述動物的視網膜感光細胞。

可選的，如上所述的方法，所述動物為嚙齒類動物。

可選的，如上所述的方法，所述動物是小鼠(Mus musculus)。