[發(fā)明專利]一種降低膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑生產(chǎn)批間差異的工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010730642.2
• 申請(qǐng)日: 2020-07-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111830260B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂燕彥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京安圖生物工程有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 付麗

本發(fā)明提供了一種降低膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑生產(chǎn)批間差異的工藝，本發(fā)明通過(guò)選擇批間差異小的原料單抗、抗體與微球偶聯(lián)過(guò)程的精確控制(反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、攪拌速度、老化溫度及時(shí)間、抗體加入速度)、分散過(guò)程選擇均質(zhì)儀的生產(chǎn)方法實(shí)現(xiàn)膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑產(chǎn)品批間差異小的目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中的工藝制備的膠乳免疫比濁試劑3批試劑的批間差異偏差都在10％以內(nèi)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種降低膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑生產(chǎn)批間差異的工藝。

背景技術(shù)

膠乳增強(qiáng)免疫比獨(dú)法(Latex?Nanoparticle-Enhanced?TurbidimetricImmunoassay,LTIA)是70年代出現(xiàn)的能夠動(dòng)態(tài)測(cè)定抗原抗體結(jié)合的檢測(cè)方法，其原理是將抗體與乳膠顆粒偶聯(lián)，在液相環(huán)境中發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，膠乳微球的存在使得整個(gè)反應(yīng)的濁度明顯增加，極大提高了檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確性和精密度，減少了非特異性反應(yīng)。其包括散射比濁法和透射比濁法。免疫散射比濁法需要特殊的散射比濁儀，難以在臨床上應(yīng)用，而免疫透射比濁法可以通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)的自動(dòng)化，更加方便、快捷、節(jié)省時(shí)間，滿足了臨床大樣本檢測(cè)的需求。

傳統(tǒng)的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法是采用多克隆抗體包被膠乳粒子進(jìn)行檢測(cè)，但是由于多克隆抗體的產(chǎn)生是通過(guò)免疫動(dòng)物取抗血清取得，而由于動(dòng)物間的個(gè)體體質(zhì)等不同，抗血清存在很大的差異，從而特別容易造成抗體的批間差異。最終導(dǎo)致膠乳試劑產(chǎn)品的批間差異大。此外，多克隆抗體可以識(shí)別任一抗原的多種表位，含有大量的非特異性結(jié)合抗體，這種交叉反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生較大的背景信號(hào)，影響檢測(cè)的特異性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種降低膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑生產(chǎn)批間差異的工藝，本發(fā)明中的工藝明顯的縮小最終制備的膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑不同批次間的產(chǎn)品差異。對(duì)于制備性質(zhì)穩(wěn)定、批次間差異很小的膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑具有很大的意義。

本發(fā)明提供一種降低膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑生產(chǎn)批間差異的工藝，包括以下步驟：

A)在攪拌的條件下，將1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液加入膠乳微球溶液中，繼續(xù)攪拌進(jìn)行活化反應(yīng)，得到活化的膠乳微球溶液；

所述步驟A)中攪拌的轉(zhuǎn)速為450～550r/min，所述活化反應(yīng)的溫度為20～30℃；

B)將單克隆抗體溶液加入所述活化的膠乳微球溶液中，在2～8℃、轉(zhuǎn)速450～550r/min的條件下持續(xù)攪拌，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)15.5～16.5小時(shí)，離心得到單克隆抗體-膠乳微球偶聯(lián)物；

C)將所述單克隆抗體-膠乳微球偶聯(lián)物加入硼酸緩沖液中，進(jìn)行均質(zhì)分散，然后在37～43℃下老化15～17小時(shí)，得到膠乳增強(qiáng)免疫比濁試劑。

優(yōu)選的，所述1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液由1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺和MES緩沖液配置得到；

所述MES緩沖液的濃度為10mmol/L，pH＝5.0；

所述1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液中1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺的濃度為1～10mg/mL。

優(yōu)選的，所述膠乳微球溶液含有粒徑為80～150nm的羧基膠乳微球，所述羧基膠乳微球的質(zhì)量濃度為10～20mg/mL

優(yōu)選的，所述膠乳微球溶液由羧基膠乳微球液和MES緩沖液配置得到；

所述MES緩沖液的濃度為10mmol/L，pH＝5.0。

優(yōu)選的，所述1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺與羧基膠乳微球的質(zhì)量比為1:(100～200)。

優(yōu)選的，所述單克隆抗體溶液由單克隆抗體和MES緩沖液配置得到，