[發明專利]玉米植株紋枯病發病的方法

有效

• 申請號: 202010729342.2
• 申請日: 2020-07-27
• 公開（公告）號: CN111849786B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 彭緒冰;彭緒偉;覃遠照;李大偉;彭緒朋;彭勇宜;劉宗坤;彭飛宜;彭緒東;張宏林;田文華;向慧玲
• 申請（專利權）人: 湖北康農種業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01G7/06;C12R1/645
• 代理公司: 重慶中之信知識產權代理事務所(普通合伙) 50213
• 代理人: 覃詩龍

本發明提供了一一種玉米植株紋枯病發病的方法，包括：S1、紋枯病菌的獲取；S2、紋枯病菌的純化；S3、紋枯病菌的擴大培養；S4、紋枯病菌的植株接種。本發明通過直接對植株進行紋枯病菌體的接種，提高了玉米植株紋枯病發病的成功率和可靠性。

技術領域

本發明涉及農業生產技術領域，尤其涉及一種玉米植株紋枯病發病的方法。

背景技術

玉米是重要的糧食作物和飼料作物，也是全世界總產量最高的農作物，其種植面積和總產量僅次于水稻和小麥。玉米含有豐富的蛋白質、脂肪、維生素、微量元素、纖維素等，具有開發高營養、高生物學功能食品的巨大潛力。

玉米紋枯病是我國玉米主產區主要真菌性病害之一，并且呈逐年加重及加速蔓延趨勢，嚴重制約玉米產量與品質。

玉米紋枯病主要危害葉鞘、葉片和穗部，也侵害莖稈。最初多由近地面的葉鞘發病，由下而上逐步發展。其癥狀為在葉片和葉鞘上形成典型的呈暗綠色水浸狀的同心斑，大面積覆蓋被侵染葉片和苞葉，或形成不規則的云紋狀病斑，中部灰褐色，邊緣深褐色，隨后病斑逐漸擴大，包圍整個葉鞘，葉片干枯。病斑向上擴展至果穗基部，果穗停止發育并迅速發展至全穗，最后死亡。

相關技術中，主要采用自然接種和人工接種兩種方式誘發玉米植物紋枯病發病。。但均存在不足之處。自然接種是將玉米植株種植于天然高發病害田塊自然環境下發病，研究依賴于自然條件下的溫度和濕度，因此具有不可控性，難以把握。一方面尋找多點適合發病的地塊，對實驗研究產生了限制；另一方面，植物生長的季節性造成了研究周期長。人工接種雖然能縮短時間，無季節性限制，但由于紋枯病對溫度和濕度要求較高，接種人員難以把控接種時間和方法，容易造成人工接種發病菌難成活、接種發病率不高等問題。基于此，一種成功率高、可靠的玉米紋枯病誘發的方法的出現勢在必行。

發明內容

針對現有技術中所存在的不足，本發明提供了一種玉米植株紋枯病發病的方法，以解決相關技術中傳統玉米植株紋枯病發病成功率不高的技術問題。

本發明提供了一種玉米植株紋枯病發病的方法，包括：

S1、紋枯病菌的獲取：取玉米紋枯病發病株莖和葉的病健交叉部位帶病斑的組織，消毒去除雜菌，水洗、吸干水分，第一培養基培養，至組織長出菌絲；挑取組織的邊緣長出的菌絲頂端，于PDA斜面培養基上培養，備用；

S2、紋枯病菌的純化：無菌水沖洗S1中制備的菌體產生的孢子，并將所述孢子的濃度稀釋為10⁸CFU/mL，然后取80～200mL稀釋后的懸浮液涂覆于瓊脂培養基，培養；切下帶有單孢子的瓊脂培養基，并將單孢子移植到第二培養基上培養，備用；

S3、紋枯病菌的擴大培養：將S2中的所述第二培養基置于黑暗的環境下培養；

S4、紋枯病菌的植株接種：將S3中備用的菌種培養液用無菌水稀釋，并配置濃度為10²～10⁶個/mL的分生孢子濾液，備用；于田間選取玉米植株處于大喇叭口期的幼苗，取1～5ml稀釋后的菌液注射于幼苗第三葉與莖稈相連的葉鞘處；玉米紋枯病發病環境培養，得發紋枯病的玉米植株。

可選地，在S1中，所述消毒殺死雜菌，水洗、吸干水分的具體步驟包括：

將帶有病斑的組織先于乙醇中浸泡10～20秒，然后移入質量分數為0.1％～0.3％的升汞溶液中浸泡2～6分鐘，以消毒去除雜菌；

將消毒后的組織轉入蒸餾水中洗滌3次，吸水紙吸干水分。

可選地，所述第一培養基和所述第二培養基均為PDA培養基；

所述PDA培養基的組分包括馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、水；其中，所述馬鈴薯、所述葡萄糖、所述瓊脂及所述水的質量之比為200:10～20:17～20:1000。