[發明專利]一種在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取-液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法

有效

• 申請號: 202010728067.2
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN111983053B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 馬盛韜;余應新;李桂英;安太成
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/86
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 彭玉婷

本發明屬于有機污染物分析技術領域，公開了一種在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取?液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法，該方法是在尿液中加入同位素內標后再加入β?葡萄糖醛苷酶?芳基硫酸酯酶，恒溫搖床上進行酶解，酶解后加入有機溶劑沉淀蛋白，冷凍離心，轉移離心后的上清液，通過自動閥切換進行在線固相萃取，然后經液相色譜三重四級桿質譜進行定量測定。經過數據處理和定量計算，得到尿液中羥基多環芳烴的含量。本發明實現對人體尿液中羥基多環芳烴代謝物的快速準確檢測，為多環芳烴的人體暴露健康風險評估提供有效的方法手段。

技術領域

本發明屬于有機污染物分析技術領域，更具體地，涉及一種在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取-液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法。

背景技術

多環芳烴(PAHs)是環境中普遍存在的污染物，主要來源于化石燃料的不完全燃燒。PAHs可以通過大氣呼吸，膳食攝入和皮膚吸收等途徑進入人體。已有研究明確指出PAHs具有致癌、致畸和致突變效應，人類罹患肺癌等多種癌癥與PAHs的暴露密切相關。PAHs在人體內的半衰期約為幾小時，被人體吸收的PAHs可經過肝臟等器官代謝解毒，形成羥基多環芳烴(OH-PAHs)代謝物從尿液和糞便等途徑排出體外。因此，可以通過檢測人體尿液中的OH-PAHs的含量來評估人體PAHs的暴露水平和負荷。相比血液，尿液更容易采集，基質相對干凈，且不受樣品體積的限制，越來越多被應用于人體生物監測中。目前，已有很多文獻報道了不同的方法應用于尿液中OH-PAHs的分析，這些方法大多需要對尿液進行一定的前處理，比如最常見的利用離線固相萃取技術對尿液中OH-PAHs進行富集和凈化，方法流程繁瑣，溶劑用量較大，費時低效，且不利于開展大規模的人體樣品篩查。

發明內容

為了解決上述現有技術存在的不足和缺點，本發明目的在于提供一種在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取-液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法，該方法可快速檢測尿樣中的OH-PAHs水平。

本發明的目的通過下述技術方案來實現：

一種在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取-液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法，包括如下具體步驟：

S1.取尿液樣品加入同位素內標物后混勻，加入β-葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶，置于恒溫搖床上在25～45℃酶解；酶解后尿液中加入有機溶劑沉淀蛋白，渦旋混勻，離心分離后取上清液，即為樣品溶液；

S2.采用自動閥切換進行在線固相萃取步驟S1所得樣品溶液，在線固相萃取富集柱為十八烷基硅烷化固定相色譜柱；流動相A為超純水，流動相B為甲醇；流速為0.2～1.0mL/min；柱溫為30～40℃；梯度洗脫程序從10～50％的甲醇開始，在1～2min內上升到100％的甲醇，然后下降到10～50％的甲醇，對待測目標化合物進行富集；

S3.采用液相色譜對待測富集目標化合物進行色譜分離，色譜柱為十八烷基硅烷化固定相；流動相A為0.1～1％乙酸的超純水；流動相B為甲醇；柱溫為30～40℃；流速為0.2～1.0mL/min；梯度洗脫程序開始為10～50％甲醇，然后升至100％甲醇，最后降至10～50％甲醇；然后采用三重四級桿質譜對富集目標化合物進行檢測，以含有相應同位素內標的不同濃度目標化合物標準品制得工作曲線，檢測得到的面積和濃度進行計算，得到各化合物的相對響應因子RRF；然后通過樣品中目標化合物與內標的面積比，計算得出尿液樣品中羥基多環芳烴的含量。

優選地，步驟S1和步驟S3中所述的同位素內標物為2-羥基萘-d₇(2-OH-Nap-d₇)、¹³C₆-3-羥基菲(¹³C₆-3-OH-Phe)、2-羥基芴-d₉(2-OH-Flu-d₉)、1-羥基芘-d₉(1-OH-Pyr-d₉)或3-羥基苯并[a]芘-d₁₁(3-OH-BaP-d₁₁)中的一種以上。