[發明專利]一種在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取-液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法

有效

• 申請號: 202010728067.2
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN111983053B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 馬盛韜;余應新;李桂英;安太成
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/86
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 彭玉婷

1.一種在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取-液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法，其特征在于，包括如下具體步驟：

S1. 取尿液樣品加入同位素內標物后混勻，加入β-葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶，置于恒溫搖床上在25~45 ℃酶解1~24 h；酶解后尿液中加入有機溶劑甲醇或/和乙腈沉淀蛋白，渦旋混勻，離心分離后取上清液，即為樣品溶液；所述尿液樣品與β-葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶的體積比為10~100：1；所述有機溶劑和酶解后尿液的體積比為0.1~10：1；所述的離心的速率為4000~12000 rpm，所述離心的溫度為4~25℃，所述離心的時間為5~30 min；

S2. 采用自動閥切換進行在線固相萃取步驟S1所得樣品溶液，在線固相萃取富集柱為十八烷基硅烷化固定相色譜柱；流動相A為超純水，流動相B為甲醇；流速為0.2~1.0 mL/min；柱溫為30~40 ℃；梯度洗脫程序從10%的甲醇開始，在1.2min內上升到100%的甲醇，保留3.8 min直至目標化合物被洗脫至分析色譜柱，然后下降到10%的甲醇，保留23 min，對待測目標化合物進行富集；

S3. 采用液相色譜對待測的富集目標化合物進行色譜分離，色譜柱為十八烷基硅烷化固定相；流動相A為0.1~1%乙酸的超純水；流動相B為甲醇；柱溫為30~40℃；流速為0.2~1.0mL/min；梯度洗脫程序開始為50%甲醇，保留15 min，然后升至90%甲醇，保留6 min，繼續升至100%甲醇，保留1.5 min，最后降至50%甲醇，保留3 min，然后采用三重四級桿質譜對富集目標化合物進行檢測，以含有相應同位素內標的不同濃度目標化合物標準品制得工作曲線，檢測得到的面積和濃度進行計算，得到待測各化合物的相對響應因子RRF；然后通過樣品中目標化合物與內標的面積比，計算得出尿液樣品中羥基多環芳烴的含量；所述的羥基多環芳烴為1-羥基萘、2-羥基萘、2-羥基芴、3-羥基芴、1-羥基菲、2-羥基菲、3-羥基菲、4-羥基菲、9-羥基菲、1-羥基芘、6-羥基?和3-羥基苯并[a]芘；羥基多環芳烴的檢出范圍為0.006~0.12 ng/mL。

2.根據權利要求1所述的在線測定尿液中羥基多環芳烴的固相萃取-液相色譜三重四級桿質譜同位素稀釋法，其特征在于，步驟S1和步驟S3中所述的同位素內標物為2-羥基萘-d₇、¹³C₆-3-羥基菲、2-羥基芴-d₉、1-羥基芘-d₉或3-羥基苯并[a]芘-d₁₁中的一種以上。