[發明專利]基于酶輔助級聯循環擴增的發夾探針組及制備方法、用途

在審

• 申請號: 202010725811.3
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN111793622A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 吳昊;鄒霈;劉婭靈;王洪勇;吳軍;韓國慶
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 謝楠

1.一種基于酶輔助級聯循環擴增的發夾探針組，其特征在于，包括

第一發夾探針，所述第一發夾探針由5’端到3’端依次包括結合生物靶標的適體序列和第一結合序列，所述適體序列與所述第一結合序列的部分堿基配對使所述第一發夾探針形成發夾結構；

第二發夾探針，所述第二發夾探針由5’端到3’端依次包括第二結合序列和二級靶標序列，所述第二結合序列為所述第一結合序列的互補序列，所述第二結合序列與所述二級靶標序列的部分堿基配對使所述第二發夾探針形成發夾結構；

第三發夾探針，所述第三發夾探針由5’端到3’端依次包括第三結合序列和熒光信號序列，所述第三結合序列為所述二級靶標序列的部分序列的互補序列，且所述二級靶標序列與所述第三結合序列互補雜交時，所述二級靶標序列的5’端為突出末端，所述第三結合序列與所述熒光信號序列部分堿基配對使所述第三發夾探針形成發夾結構；

所述熒光信號序列為熒光分子的模板序列。

2.根據權利要求1所述的基于酶輔助級聯循環擴增的發夾探針組，其特征在于：

所述適體序列由5’端到3’端依次包括序列a、序列b和序列c；所述第一結合序列由5’端到3’端依次包括序列d，和與序列b互補的序列b^*；所述適體序列的序列b與序列b^*配對形成發夾探針的莖干區，序列d和序列c形成發夾探針的莖環區；

所述第二結合序列由5’端到3’端依次包括序列b，和與序列d互補的序列d^*；所述二級靶標序列由5’端到3’端依次包括突出末端序列、序列e和序列d；所述第二結合序列的序列d^*與所述二級靶標序列的序列d配對形成發夾探針的莖干區，突出末端序列和序列e形成發夾探針的莖環區；

所述第三結合序列由5’端到3’端依次包括序列d^*，和與序列e互補的序列e^*；所述熒光信號序列由5’端到3’端依次包括序列f和序列e；所述第三結合序列的序列e^*與所述熒光信號序列的序列e配對形成發夾探針的莖干區，序列f形成發夾探針的莖環區。

3.根據權利要求1或2所述的基于酶輔助級聯循環擴增的發夾探針組，其特征在于，所述適體序列是以黃曲霉素為生物靶標的適體序列，所述熒光信號序列為AgNCs的模板序列；

優選地，所述適體序列是以黃曲霉毒素B1為生物靶標的適體序列；優選地，所述適體序列包含50個堿基，所述熒光信號序列包含12個胞嘧啶堿基。

4.根據權利要求1-3任一項所述的基于酶輔助級聯循環擴增的發夾探針組，其特征在于，所述第一發夾探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二發夾探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述第三發夾探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

5.一種基于酶輔助級聯循環擴增的檢測體系，其特征在于，包括權利要求1-4任一項所述的發夾探針組；

優選地，所述檢測體系中，所述第一發夾探針、第二發夾探針和第三發夾探針的摩爾比為1:1:(1-1.5)。

6.一種基于酶輔助級聯循環擴增的生物傳感器，其特征在于，包括權利要求1-4任一項所述的發夾探針組，或權利要求5所述的檢測體系。

7.權利要求1-4任一項所述的基于酶輔助級聯循環擴增的發夾探針組、權利要求5所述的檢測體系，或權利要求6所述的生物傳感器在如下a₁-a₂至少一種中的用途：

a₁，檢測生物靶標；a₂，制備檢測生物靶標的產品；

優選地，所述生物靶標為黃曲霉毒素B1。