[發(fā)明專利]一種研究雞lncRNA互作蛋白的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010724879.X
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN111856033A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李碧春;姜景譯;左其生;袁霞;丁穎
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務(wù)所(普通合伙) 32222
• 代理人: 沈志海

1.一種研究雞lncRNA互作蛋白的方法，其特征是，通過設(shè)計并合成了LncPGCR的sense和antisense鏈來進(jìn)行RNA-pull down，篩選出互作蛋白；進(jìn)一步結(jié)合RIP實驗技術(shù)，對互作蛋白表達(dá)變化進(jìn)行了探究，豐富了lncRNA與蛋白質(zhì)互作的研究。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種研究雞lncRNA互作蛋白的方法，其特征是，具體包括如下步驟：

1）獲取LncPGCR的RNA；

2） RNA pull-down吸附與LncPGCR的RNA 相互作用的蛋白質(zhì)；

3）鑒定RNA pull down 獲得的互作蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種研究雞lncRNA互作蛋白的方法，其特征是，所述步驟1），體外擴(kuò)增LncPGCR的sense和antisense鏈，以得到體外轉(zhuǎn)錄的DNA 模板；用Ambion 的體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 Maxiscript T7 進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，獲取LncPGCR的RNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種研究雞lncRNA互作蛋白的方法，其特征是，所述步驟2），具體包括：

A、目的 RNA 的探針標(biāo)記；

B、標(biāo)記的目的 RNA 與鏈霉親和素磁珠結(jié)合；

C、蛋白與標(biāo)記的 RNA 結(jié)合；

D、 RNA 結(jié)合蛋白復(fù)合物的洗脫；

E、蛋白質(zhì)銀染。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種研究雞lncRNA互作蛋白的方法，其特征是，所述步驟3），具體包括：

A、蛋白質(zhì)還原烷基化和酶解以及酶解后處理；

B、蛋白質(zhì)酶解多肽的LC-MS/MS 鑒定以及Proteinpilot 檢索；

C、 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀。