[發明專利]一種檢測醇類溶液中內毒素的方法

在審

• 申請號: 202010722657.4
• 申請日: 2020-07-24
• 公開（公告）號: CN111856017A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 毛斌杰;褚培忠;陳杭
• 申請（專利權）人: 褚培忠
• 主分類號: G01N33/579
• 分類號: G01N33/579;G01N33/68
• 代理公司: 杭州凌通知識產權代理有限公司 33316
• 代理人: 王瓊

1.一種檢測醇類溶液中內毒素的方法,其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、檢測前準備：準備檢測所需要的容器和溶液，包括含量0～100％的醇類溶液、若干數量的裝液玻璃容器、恒溫干熱箱、移液器、實驗用水、75％酒精棉球若干、砂輪、封口膜、旋渦混合器、鱟試劑和培養箱；并對準備物品或試劑進行質量檢測，確保物品可用且試劑符合標準；所述鱟試劑選擇0.1ml/支且靈敏度為0.03EU/ml的鱟試劑；

步驟二、檢測前去熱源：分別將上述步驟中準備的所述裝液玻璃容器進行熱源去除；所述實驗用水使用成品無熱源的BET水；

步驟三、樣品前處理：選取步驟一中準備的醇類溶液若干毫升，選取經過步驟二處理的所述裝液玻璃容器一個，將所述醇類溶液放入所述裝液玻璃容器中，將裝有所述醇類溶液的所述裝液玻璃容器放置在所述恒溫干熱箱內部，在80℃-100℃溫度下加熱至一定情形時，取出所述裝液玻璃容器并冷卻至室溫，用步驟二所述BET水使加熱后的溶液恢復原有體積，形成樣品；所述一定情形是指所述裝液玻璃容器內部的所述醇類溶液的液體體積減少一半以上且所述液體未蒸干時；

步驟四、配制檢測用供試品溶液：取一定量經過步驟三前處理得到的樣品，選取經過步驟二處理的所述裝液玻璃容器一個，將去除的所述樣品放入所述裝液玻璃容器中，使用步驟一中準備的移液槍，吸取步驟二所述的BET水若干毫升，按照一定的稀釋倍數將若干毫升的所述BET水，加入放有所述樣品的所述裝液玻璃容器中，得到檢測用供試品溶液；最大有效稀釋倍數根據現有文件中提出的公式MVD＝CL/λ計算得出；

步驟五、配置細菌內毒素標準溶液：選取一支細菌內毒素工作標準品，輕彈所述細菌內毒素工作標準品的瓶壁，使所述細菌內毒素工作標準品內部的粉末落入所述細菌內毒素工作標準品的瓶底，使用步驟一中準備的砂輪在所述細菌內毒素工作標準品的瓶頸上輕輕劃痕，使用步驟一中準備的75％酒精棉球對所述瓶頸上的劃痕進行擦拭，開啟所述細菌內毒素工作標準品，開啟后，在所述細菌內毒素工作標準品的內部加入一定量的BET水，使所述BET水溶解所述細菌內毒素工作標準品內部的內容物，使用步驟一中準備的封口膜將所述細菌內毒素工作標準品的瓶口封嚴，然后放置在步驟一中準備的旋渦混合器上，混合一定時間后，得到細菌內毒素標準溶液；

步驟六、制備一定濃度的細菌內毒素標準溶液：在經過步驟五得到的細菌內毒素標準溶液內部，添加一定量的BET水，將所述細菌內毒素標準溶液稀釋為一定濃度的細菌內毒素標準溶液；

步驟七、制備對照組溶液：使用步驟一中準備的移液器分別吸取一定量的檢測用供試品溶液和一定量的BET水制備成對照溶液A；使用步驟一中準備的移液器分別吸取一定量的檢測用供試品溶液和一定量的一定濃度的細菌內毒素標準溶液制備成對照溶液B；使用步驟一中準備的移液器分別吸取一定量的BET水和一定量的一定濃度的細菌內毒素標準溶液制備成對照溶液C；使用步驟一中準備的移液器吸取一定量的BET水制備成對照溶液D；

步驟八、鱟試劑加樣：重復步驟七，制備添加溶液A、添加溶液B、添加溶液C和添加溶液D各兩管，選取步驟一中準備的鱟試劑若干支，輕彈所述鱟試劑的瓶壁使所述鱟試劑內部的粉末落入瓶底，用步驟一中準備的75％的酒精棉球擦拭瓶口后開啟，使用移液器，分別將所述添加溶液A、所述添加溶液B、所述添加溶液C和所述添加溶液D添加到所述鱟試劑的反應管內部，每濃度平行兩管；

步驟九、培養：將步驟八得到的加樣鱟試劑分別放入步驟一中準備的培養箱中，在一定環境下培養一定時間；

步驟十、結果判定：分別去除加樣鱟試劑，將每一個所述加樣鱟試劑均平滑倒轉180°，若所述加樣鱟試劑的管內形成凝膠，所述凝膠不變形且所述凝膠不從所述加樣鱟試劑的管壁脫落，則結果為陽性；若沒有形成完整的凝膠或所述凝膠不堅實、變形并從管壁脫落，則結果為陰性。

2.根據權利要求1所述的一種檢測醇類溶液中內毒素的方法，其特征在于：所述步驟二中的熱源去除步驟為在180℃下干燥3—4小時。

3.根據權利要求1所述的一種檢測醇類溶液中內毒素的方法，其特征在于：所述步驟五中的所述細菌內毒素工作標準品開啟過程中需要防止玻璃屑落入所述細菌內毒素工作標準品的瓶體內部；所述步驟五中的BET水的使用量為1ml；所述步驟五中的混合時間為十五分鐘。