[發(fā)明專利]用于LAMP檢測(cè)牛結(jié)核分枝桿菌的組合物、試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010722050.6
• 申請(qǐng)日: 2020-07-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113969321A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陶藝;蔡?hào)|洋;蘭英;王劍;杜文斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京唐頌永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

1.一種用于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)牛結(jié)核分枝桿菌的組合物，其特征在于，所述組合物包含用于檢測(cè)mpb70基因的至少一個(gè)靶區(qū)域的引物和探針；其中，所述mpb70基因序列如SEQ ID No.8所示，SEQ ID No.8：ATGAAGGTAAAGAACACAATTGCGGCAACCAGTTTCGCGGCGGCCGGCCTGGCGGCTCTGGCGGTGGCTGTCTCACCGCCGGCGGCCGCAGGCGATCTGGTGGGCCCGGGCTGCGCGGAATACGCGGCAGCCAATCCCACTGGGCCGGCCTCGGTGCAGGGAATGTCGCAGGACCCGGTCGCGGTGGCGGCCTCGAACAATCCGGAGTTGACAACGCTGACGGCTGCACTGTCGGGCCAGCTCAATCCGCAAGTAAACCTGGTGGACACCCTCAACAGCGGTCAGTACACGGTGTTCGCACCGACCAACGCGGCATTTAGCAAGCTGCCGGCATCCACGATCGACGAGCTCAAGACCAATTCGTCACTGCTGACCAGCATCCTGACCTACCACGTAGTGGCCGGCCAAACCAGCCCGGCCAACGTCGTCGGCACCCGTCAGACCCTCCAGGGCGCCAGCGTGACGGTGACCGGTCAGGGTAACAGCCTCAAGGTCGGTAACGCCGACGTCGTCTGTGGTGGGGTGTCTACCGCCAACGCGACGGTGTACATGATTGACAGCGTGCTAATGCCTCCGGCGTAA；

所述引物和探針等同、互補(bǔ)或雜交于所述靶區(qū)域；優(yōu)選地，所述引物和探針在中等嚴(yán)緊或嚴(yán)緊條件下雜交于所述靶區(qū)域。

2.一種用于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)牛結(jié)核分枝桿菌的組合物，其特征在于，所述組合物包含用于檢測(cè)mpb70基因的至少一個(gè)靶區(qū)域的引物和探針；

其中，所述靶區(qū)域?yàn)镾EQ ID No.9:CGAGCTCAAGACCAATTCGTCACTGCTGACCAGCATCCTGACCTACCACGTAGTGGCCGGCCAAACCAGCCCGGCCAACGTCGTCGGCACCCGTCAGACCCTCCAGGGCGCCAGCGTGACGGTGACCGGTCAGGGTAACAGCCTCAAGGTCGGTAACGCCGACGTCGTCTGTGGTGGGGTGT；

所述引物和探針等同、互補(bǔ)或雜交于所述靶區(qū)域；優(yōu)選地，所述引物和探針在中等嚴(yán)緊或嚴(yán)緊條件下雜交于所述靶區(qū)域。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，所述引物為以下引物組合物中的一種或兩種以上：

1)引物F₃，其序列如SEQ ID NO.1:CGAGCTCAAGACCAATTCGT所示，和引物B₃，其序列如SEQID NO.2:ACACCCCACCACAGACG所示；

2)引物FIP，其序列如SEQ ID NO.3:ACGTTGGCCGGGCTGGTTTCACTGCTGACCAGCATCCT所示，和引物BIP，其序列如SEQ ID NO.4:TCGGCACCCGTCAGACCCTCGTTACCGACCTTGAGGC所示；

3)引物L(fēng)F，其序列如SEQ ID NO.5:CCGGCCACTACGTGGTAGGT所示，和引物L(fēng)B，其序列如SEQ ID NO.6:ACGGTGACCGGTCAGGGTA所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，所述探針為以下探針組合物：

探針FIP，其序列如SEQ ID NO.3:ACGTTGGCCGGGCTGGTTTCACTGCTGACCAGCATCCT所示，

探針Fd，其序列如SEQ ID NO.7:AAACCAGCCCGGCCAACGT所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于，所述探針FIP的5’末端或3’末端或者所述探針Fd的5’末端或3’末端連接熒光報(bào)告基團(tuán)；所述探針FIP的5’末端或3’末端或者所述探針Fd的5’末端或3’末端連接熒光猝滅基團(tuán)。