[發明專利]確定多肽二硫鍵位置的方法在審
| 申請號： | 202010720190.X | 申請日： | 2020-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN111781288A | 公開（公告）日： | 2020-10-16 |
| 發明（設計）人： | 吳佩澤;李明;李紅梅 | 申請（專利權）人： | 中國計量科學研究院 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/88 |
| 代理公司： | 北京鼎真知識產權代理事務所(普通合伙) 11815 | 代理人： | 張濯非 |
| 地址： | 100029 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 確定 多肽 二硫鍵 位置 方法 | ||
1.一種確定多肽二硫鍵位置的方法，其特征在于，包括：
將多肽樣本進行第一液相色譜串聯質譜檢測，以便得到第一液相色譜串聯質譜檢測結果；
將所述多肽樣本與還原劑和有機酸溶液混合，在第一預定時間得到部分還原產物，在第二預定時間得到完全還原產物；
將所述部分還原產物進行第二液相色譜串聯質譜檢測，以便得到第二液相色譜串聯質譜檢測結果；
將所述完全還原產物進行第三液相色譜串聯質譜檢測，以便得到第三液相色譜串聯質譜檢測結果；以及
基于所述第一液相色譜串聯質譜檢測結果、所述第二液相色譜串聯質譜檢測結果和所述第三液相色譜串聯質譜檢測結果確定所述多肽二硫鍵位置。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽樣本的濃度為80-120μg/g，優選地，為100μg/g。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述還原劑為三(2-羧乙基)膦，
任選地，所述還原劑與所述多肽樣本的摩爾比例為4-6:1。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述有機酸為三氟乙酸或甲酸，優選地，為甲酸，更優選地，為0.5％的甲酸溶液。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲酸的加入量為所述多肽樣本與所述還原劑體積之和的0.8-1.2倍。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一預定時間為1.5-2.5小時，所述第二預定時間為3.5-5小時。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二液相色譜串聯質譜檢測結果與所述第三液相色譜串聯質譜檢測結果中相同子離子存在-2Da的質量差，則所述子離子處存在二硫鍵。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，相同子離子在所述第二液相色譜串聯質譜檢測結果不出現，并且在所述第三液相色譜串聯質譜檢測結果中出現并相對離子強度大于5％，則所述子離子位于二硫鍵內部。
9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色譜串聯質譜檢測的條件：
所述第一液相色譜串聯質譜檢測的液相色譜串聯質譜檢測條件為：
檢測方式為全掃描模式full scan；
離子源為ESI源；
質譜掃描范圍：150-2000，
所述第二液相色譜串聯質譜檢測與所述第三液相色譜串聯質譜檢測的檢測條件均為：
液相色譜串聯質譜檢測方式：串聯液相色譜串聯質譜檢測模式(HCD和CID模式)；
窗口寬度：0.9-1.0；
質譜掃描范圍：150-2000。
10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽樣本含有1-4個二硫鍵。
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