[發(fā)明專利]一種桉樹葉復(fù)合活性提取物工藝及其抗菌應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010718542.8
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN113969300A
• 公開（公告）日: 2022-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鈞翔;陳成;陸益;康思寧;周碧柳
• 申請（專利權(quán)）人: 啟迪禾美生物科技（嘉興）有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14;A01N65/28;A01N63/50;A01P3/00;A01P1/00
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• 代理人: 暫無信息

1.一種新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物，其通過以下步驟獲得：

1).將新鮮采摘的藍(lán)桉(Eucalyptus globulus Labill.)樹葉洗滌，剔出雜質(zhì)，過篩粉碎40-100目，按料液比1∶6-12，置于濃度為0.4％-1％的氯化鈉溶液中，80℃水浴提取4-6h；

2).減壓過濾后，將得到的新鮮桉樹葉粗提原液濃縮為0.5-1.2g/ml的原藥濃度；

3).在室溫下用80％乙醇提取新鮮桉樹葉粗提原液，然后將乙醇提取后的殘?jiān)鋬龈稍铮鳛樾迈r桉樹葉粗蛋白原料；

4).新鮮桉樹葉蛋白原料酶解獲得新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物；

5).通過超濾新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物進(jìn)一步優(yōu)化桉樹抗菌多肽成分；新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物經(jīng)膜過濾，再用4kDa(Mw)的纖維素膜分離，獲得分子量為Mw＜4kDa、Mw＞4kda不同組分的活性提取物，Mw＜4kDa組分即為所述新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物。

2.權(quán)利要求1所述的新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物，所述步驟4的酶解步驟如下：

新鮮桉樹葉蛋白原料在37℃下使用胃蛋白酶(pH 2.0)和胰蛋白酶(pH8.0)水解3小時(shí)；胃蛋白酶和胰蛋白酶的濃度為5％(w/w)，酶在沸水中失活10分鐘，然后在9000g下在4℃離心10分鐘，上清液的可溶性部分經(jīng)胃蛋白酶和胰蛋白酶再次酶解并凍干得到新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物。

3.權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物，所述步驟5所述膜過濾中膜孔徑為0.22μm。

4.一種桉樹葉復(fù)合活性提取物的提取方法，其步驟包括：

1).將新鮮采摘的藍(lán)桉(Eucalyptus globulus Labill.)樹葉洗滌、剔出雜質(zhì)，過篩粉碎40-100目，按料液比1：6-12，置于濃度為0.4％-1％的氯化鈉溶液中，80℃水浴提取4-6h；

2).減壓過濾后，將得到的新鮮桉樹葉粗提原液濃縮為0.5-1.2g/ml的原藥濃度；

3).在室溫下用80％乙醇提取新鮮桉樹葉粗提原液，然后將乙醇提取后的殘?jiān)鋬龈稍铮鳛樾迈r桉樹葉粗蛋白原料；

4).新鮮桉樹葉蛋白原料酶解獲得新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物；

5).通過超濾新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物進(jìn)一步優(yōu)化桉樹抗菌多肽成分；新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物經(jīng)膜過濾，再用4kDa(Mw)的纖維素膜分離，獲得分子量為Mw＜4kDa、Mw＞4kda不同組分的活性提取物，選擇Mw＜4kDa組分進(jìn)行進(jìn)一步的活性驗(yàn)證。

5.權(quán)利要求4所述的方法，所述步驟4的酶解步驟如下：

新鮮桉樹葉蛋白原料在37℃下使用胃蛋白酶(pH 2.0)和胰蛋白酶(pH8.0)水解3小時(shí)；胃蛋白酶和胰蛋白酶的濃度為5％(w/w)，酶在沸水中失活10分鐘，然后在9000g下在4℃離心10分鐘，上清液的可溶性部分經(jīng)胃蛋白酶和胰蛋白酶再次酶解并凍干得到新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物。

6.權(quán)利要求4或5任一項(xiàng)所述的方法，所述步驟5所述膜過濾中膜孔徑為0.22μm。

7.權(quán)利要求1-3所述的新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物在制備抗菌劑中的用途。

8.一種抗菌劑，其包括權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的新鮮桉樹葉蛋白多肽水解物。