[發(fā)明專利]一種純化C1q蛋白的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010718525.4
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN113968900B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 易維京;裴大毛;朱攀;李賽;趙忠顥
• 申請（專利權(quán)）人: 中元匯吉生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/36;C07K1/18;C07K1/34;C07K1/30
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本發(fā)明屬于蛋白純化技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種純化C1q蛋白的方法。本發(fā)明通過低鹽離子溶液透析、強(qiáng)陽離子交換柱層析以及硫酸銨沉淀結(jié)合來純化目的蛋白C1q，適用于存放時(shí)間長的不新鮮血清樣本，同時(shí)將目的蛋白C1q的純化時(shí)間濃縮到了48h內(nèi)，在極大的縮短生產(chǎn)周期的基礎(chǔ)上，目的蛋白的純化質(zhì)量(回收率以及蛋白活性)也得到了保證，最大程度的降低了生產(chǎn)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種C1q的純化方法。

背景技術(shù)

C1q是補(bǔ)體C1的第一個亞成分，分子量390kDa，pI?9.3。由A、B鏈通過二硫鍵相互連接，與C鏈非共價(jià)結(jié)合形成花束狀六聚體結(jié)構(gòu)。補(bǔ)體經(jīng)典途徑中，C1q球狀頭部通過識別結(jié)合IgG或IgM免疫復(fù)合物Fc段補(bǔ)體結(jié)合部位啟動并激活補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)，清除抗原抗體復(fù)合物。現(xiàn)研究表明，C1q與多種腎病、動脈粥樣硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等系統(tǒng)性疾病相關(guān)。

人血清中，C1q含量約為150μg/ml，而在實(shí)際生產(chǎn)過程中，由于供應(yīng)鏈不及時(shí)以及其他問題導(dǎo)致的樣本存放時(shí)間過長，以至于產(chǎn)生不新鮮的血清樣本，而在不新鮮的血清樣本中，由于存放時(shí)間過長，蛋白質(zhì)大量降解，目的蛋白C1q的含量大大降低，進(jìn)一步加大了蛋白純化的難度。而市面上現(xiàn)存的血清蛋白純化方法主要分為三類：(1)親和層析法；(2)EDTA或EGTA低鹽透析沉淀法；(3)優(yōu)球蛋白沉淀結(jié)合離子交換層析。其純化樣品主要選自新鮮血清，且其純化效率低，耗時(shí)長、工藝復(fù)雜，成本高，不適用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。因此現(xiàn)階段急需一種能夠高效快速從存放時(shí)間較長、不新鮮的血清樣本中提取C1q的純化方式。

發(fā)明內(nèi)容

因此本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：針對現(xiàn)有技術(shù)從人不新鮮血清中提純C1q耗時(shí)長、回收率低等問題，提供一種C1q蛋白的純化方法。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提供的技術(shù)方案是：本發(fā)明提供了一種C1q蛋白的純化方法。

本發(fā)明的上述目的是通過下列技術(shù)方案實(shí)施的：

一種純化C1q蛋白的方法，其特征在于，所述方法為采用低鹽離子溶液透析、強(qiáng)陽離子交換柱層析以及硫酸銨沉淀進(jìn)行蛋白純化，所述強(qiáng)陽離子交換柱的填料選自UniGel-30SP、UniGel-50SP或UniGel-80SP中的至少一種。。

優(yōu)選地，所述低鹽離子溶液透析包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：將樣本置于2-6℃，8000-12000g離心20-30min，棄沉淀；

(2)透析：將上清透析于低鹽離子溶液中；

(3)過濾：收集透析后的上清，過濾膜，收集濾液。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中的低鹽離子溶液為pH7-8、20-30mM的EGTA溶液。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中的低鹽離子溶液為pH7-8、6-12mM的EDTA溶液。

優(yōu)選地，所述步驟(3)中的濾膜粒徑大小為0.2-2μm。

優(yōu)選地，所述強(qiáng)陽離子交換柱層析包括以下步驟：

(1)柱平衡：用2M?NaCl與水依次洗滌柱子，之后用平衡緩沖液A進(jìn)行平衡；

(2)上樣：將低鹽離子溶液透析后樣品加載到平衡后的柱子中，流速度控制在140-160cm/h；

(3)平衡：用平衡緩沖液A繼續(xù)沖洗柱子，使未結(jié)合的組分從柱子上分離；

(4)洗脫：用洗脫緩沖液B進(jìn)行洗脫，使結(jié)合后的目的蛋白被充分洗脫下來，收集洗脫液并保存。

優(yōu)選地，所述方法中平衡緩沖液A為pH7.0-8.0?20mM的PBS，所述洗脫緩沖液B為平衡緩沖液A中補(bǔ)加350mM?NaCl。

優(yōu)選地，所述硫酸銨沉淀包括以下步驟：