[發(fā)明專利]一種純化C1q蛋白的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010718525.4 | 申請日： | 2020-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN113968900B | 公開（公告）日： | 2023-07-25 |
| 發(fā)明（設計）人： | 易維京;裴大毛;朱攀;李賽;趙忠顥 | 申請（專利權）人： | 中元匯吉生物技術股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/47 | 分類號： | C07K14/47;C07K1/36;C07K1/18;C07K1/34;C07K1/30 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 400037 重慶市大渡口區(qū)*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 純化 c1q 蛋白 方法 | ||
1.一種純化C1q蛋白的方法，其特征在于，所述方法為采用低鹽離子透析、強陽離子交換柱層析以及硫酸銨沉淀進行蛋白純化，
所述低鹽離子透析包括以下步驟：
(1)預處理：將樣本置于4℃，8000-12000g離心20-30min，棄沉淀；
(2)透析：將上清透析于低鹽離子溶液中；
(3)過濾：收集透析后的上清，過濾膜，收集濾液；
所述步驟(2)中的低鹽離子溶液為20-40mM?pH值為7-8的EGTA溶液或5-20mM?pH值為7.5-8.5的EDTA溶液；
所述步驟(3)中的過濾膜粒徑為0.2-0.8μm；
所述強陽離子交換柱的填料選自UniGel-30SP、UniGel-50SP或
UniGel-80SP中的至少一種。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述低鹽離子溶液為30mM?EGTA溶液。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述低鹽離子溶液為10mM?EDTA溶液。
4.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述低鹽離子溶液pH為7.5。
5.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述低鹽離子溶液pH為8.0。
6.根據(jù)權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述強陽離子交換柱層析包括以下步驟：
(1)柱平衡：用2M?NaCl與水洗滌柱子，之后用平衡緩沖液A進行平衡；
(2)上樣：將低鹽離子溶液透析后樣品加載到平衡后的柱子中，流速度控制在140-160cm/h；
(3)平衡：用平衡緩沖液A繼續(xù)沖洗柱子，使未結合的組分從柱子上分離；
(4)洗脫：用洗脫緩沖液B進行洗脫，使結合后的目的蛋白被充分洗脫下來，收集洗脫液并保存。
7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法中平衡緩沖液為pH7.0-8.020mM的PBS，所述洗脫緩沖液B為平衡緩沖液A中補加350mM?NaCl。
8.根據(jù)權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述硫酸銨沉淀包括以下步驟：
(1)在強陽離子交換柱層析后樣品中加入飽和(NH4)2SO4至終濃度為30％-40％，2-6℃下靜置6-8min，8000-12000g離心6-8min，收集沉淀；
(2)用保存緩沖液C溶解沉淀，并于2-6℃下透析于保存緩沖液C中，透析后溶液即為目的蛋白。
9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的保存緩沖液為0.75MNaCl、0.02M?acetate?buffer、0.01M?EDTA，pH?7.5的溶液。
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