[發(fā)明專利]一種定量檢測人消化道內(nèi)短鏈脂肪酸的方法

在審

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• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN112034055A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郝海紅;劉春貝;王俊豪;陶燕飛;黃玲利;王旭;陳冬梅;彭大鵬;王玉蓮;潘源虎;謝書宇;程古月;劉振利;瞿偉;謝長清;黃嘯;郭金麗
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 深圳貝谷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44635
• 代理人: 韋乃榮

1.一種定量檢測人消化道內(nèi)短鏈脂肪酸的方法,其特征在于,包括以下步驟：

步驟1：采用GC檢測的方法對不同濃度短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行測定，記錄八種短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖和峰面積，進(jìn)行線性回歸分析，繪制得到各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

步驟2：在糞便懸液中分別加入高、中、低三個濃度的短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液得到各個濃度的混合溶液，將所述混合溶液按照凈化提取方法進(jìn)行凈化提取后進(jìn)行GC檢測；

步驟3：對步驟2進(jìn)行重復(fù)操作，記錄并計算平均值，計算日內(nèi)相對誤差即為日內(nèi)變異系數(shù)；計算平均值和相對誤差，得到日間變異系數(shù)；準(zhǔn)確度和精密度分別用回收率和變異系數(shù)來表示；回收率采用單點校準(zhǔn)法計算，公式如下：

公式中：X表示回收率；A表示峰面積；V表示待測提取液吹干后定容體積，單位是mL；As表示短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的峰面積；W表示檢測的混合溶液體積，單位是mL；

步驟4：將糞便懸液按照凈化提取方法進(jìn)行凈化提取后進(jìn)行GC檢測，記錄色譜圖和峰面積，并以步驟2所得的線性回歸方程分別計算出不同時間點取樣所得糞便懸液中八種脂肪酸的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種定量檢測人消化道內(nèi)短鏈脂肪酸的方法，其特征在于：步驟1包括選取7份不同濃度的短鏈脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行測定。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種定量檢測人消化道內(nèi)短鏈脂肪酸的方法，其特征在于：步驟3包括：

步驟31：同一天對步驟2進(jìn)行重復(fù)操作5次，取平均值，計算日內(nèi)相對誤差即為日內(nèi)變異系數(shù)；

步驟32：對步驟31進(jìn)行重復(fù)操作5天，計算平均值和相對誤差，得到日間變異系數(shù)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種定量檢測人消化道內(nèi)短鏈脂肪酸的方法，其特征在于：所述GC檢測的條件如下：

色譜柱：DB-FFAP 125-3237，30m×0.53mm×0.50um；

載氣采用高純氮氣N₂，氣體流速為14.4mL/min；

進(jìn)樣口采用分流進(jìn)樣，進(jìn)樣時間為1.0min，溫度為200℃；

檢測器：FID檢測器，溫度240℃；

流速：H2 30mL/min，空氣300mL/min；

尾吹氣采用N2，流速為20mL/min

進(jìn)樣量為1μL；

升溫程序方案為：溫度為100℃時，升溫速率是0℃/min，保留時間1min；

溫度為180℃時，升溫速率是8℃/min，保留時間1min；溫度為200℃時，升溫速率是20℃/min，保留時間2min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種定量檢測人消化道內(nèi)短鏈脂肪酸的方法，其特征在于：所述凈化提取方法為向糞便懸液中加6mol/L的鹽酸從而將PH值調(diào)整為2-3，室溫條件下進(jìn)行渦旋震蕩10min，5000r/min離心20min，取上清液。