[發明專利]一種定量檢測人消化道內短鏈脂肪酸的方法

在審

• 申請號: 202010717907.5
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN112034055A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 郝海紅;劉春貝;王俊豪;陶燕飛;黃玲利;王旭;陳冬梅;彭大鵬;王玉蓮;潘源虎;謝書宇;程古月;劉振利;瞿偉;謝長清;黃嘯;郭金麗
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 深圳貝谷知識產權代理事務所(普通合伙) 44635
• 代理人: 韋乃榮

本發明公開了一種定量檢測人消化道內短鏈脂肪酸的方法，包括以下步驟：采用GC檢測的方法對不同濃度短鏈脂肪酸標準品溶液進行測定，記錄短鏈脂肪酸標準品溶液的色譜圖和峰面積，進行線性回歸分析，繪制得到標準曲線；在糞便懸液中分別加入高、中、低三個濃度的短鏈脂肪酸標準品溶液得到混合溶液，本發明的方法準確度高，精確度和靈敏度好，雜質較少，作為人腸道內短鏈脂肪酸的含量檢測方法，對短鏈脂肪酸在人體內的代謝分布檢測提供了很好的指導意義；本發明針對常規的GC法進行了改進，延遲了出峰時間，增加了各峰之間的分離度，使得目標藥物峰的靈敏度增高，與原有GC方法相比，回收率提高。

技術領域

本發明涉及定量檢測技術領域，具體涉及一種定量檢測人消化道內短鏈 脂肪酸的方法。

背景技術

短鏈脂肪酸(SCFAs)主要由不可消化碳水化合物的結腸發酵形成，但 少量支鏈SCFAs也可由不可消化蛋白質形成雖然乙酸、丙酸和丁酸被認為 是形成的最重要的SCFAs，但糞便中也可發現異丁酸、正戊酸、異戊酸、己 酸和庚酸，如大量的乳酸和琥珀酸。結腸中的SCFAs是粘膜細胞的重要營 養素，可能刺激結腸菌的增殖并增加血液流量。丁酸是一種特殊的酸，這 種酸可能在結腸疾病的預防和治療中起到關鍵作用。大量SCFAs的產生還 可能刺激人體對水和礦物質的吸收，從而更快地從腹瀉中恢復并預防礦物 質缺乏。SCFAs也可能具有代謝作用，并且已經證明丙酸可能抑制肝臟中膽 固醇的合成不同類型的碳水化合物產生不同數量和模式的SCFAs，可能起作 用的因素是碳水化合物的組成和分子量。為了評估膳食成分對健康受試者 和患有結腸疾病的患者產生SCFAs的影響，關鍵是要有一種有效且廉價的 分析方法，能夠在各種體液(如糞便)中識別和定量SCFAs。此外，開發對 環境影響最小的方法也很重要。

SCFAs已通過多種技術進行定量，包括酶法，氣相色譜法，液相色譜法， 離子色譜法，薄層色譜法、毛細管電泳和穩定同位素示蹤技術，在各種方 法中，氣相色譜法是分析超臨界流體的最常用方法，因為它具有分辨率高、 靈敏度高和儀器便宜等優點。以前研究SCFAs的氣相色譜分析時，有機溶 劑萃取、真空蒸餾、超過濾、凈化和捕集技術和固相微萃取是常用的清潔 預處理方法。此外，SCFAs的衍生化通常也作為必要的預處理進行，并且已經使用了不同的試劑，盡管這些預處理已經產生了良好的凈化效果和火焰 電離檢測器的更高響應，但它們相對比較耗時，也可能降低回收率，并影 響方法的準確性和重復性，此外，在上述大多數方法中，使用了大量對環 境和人體健康有害的有機溶劑和試劑，目前需要一種簡單、環保的方法來 測定含少量預處理的短鏈脂肪酸。

發明內容

本發明的目的就在于為了解決上述問題而提供一種定量檢測人消化道 內短鏈脂肪酸的方法，具有準確度高，精確度和靈敏度好，簡單和環保， 回收率提高等優點，詳見下文闡述。

為實現上述目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供的一種定量檢測人消化道內短鏈脂肪酸的方法，包括以下 步驟：

步驟1：采用GC檢測的方法對不同濃度短鏈脂肪酸標準品溶液進行測 定，記錄八種短鏈脂肪酸標準品溶液的色譜圖和峰面積，進行線性回歸分 析，繪制得到各自的標準曲線；

步驟2：在糞便懸液中分別加入高、中、低三個濃度的短鏈脂肪酸標準 品溶液得到各個濃度的混合溶液，將所述混合溶液按照凈化提取方法進行 凈化提取后進行GC檢測；

步驟3：對步驟2進行重復操作，記錄并計算平均值，計算日內相對誤 差即為日內變異系數；計算平均值和相對誤差，得到日間變異系數；準確 度和精密度分別用回收率和變異系數來表示；回收率采用單點校準法計算， 公式如下：

公式中：X表示回收率；A表示峰面積；V表示待測提取液吹干后定容 體積，單位是mL；As表示短鏈脂肪酸標準品溶液的峰面積；W表示檢測的 混合溶液體積，單位是mL；