[發(fā)明專利]用于改進(jìn)細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)RNA分離效率的RNA提取方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010713846.5
• 申請日: 2020-07-22
• 公開（公告）號: CN111793620A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曾妮
• 申請（專利權(quán)）人: 曾妮
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

1.一種用于改進(jìn)細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)RNA分離效率的RNA提取方法，其特征在于，所述提取方法包括：向細(xì)胞中加入胞膜裂解液后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，當(dāng)死亡細(xì)胞占總細(xì)胞量的60-80％時停止裂解，將裂解產(chǎn)物進(jìn)行核質(zhì)分離并分別提取RNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，加入裂解液后每3-5分鐘進(jìn)行一次細(xì)胞計數(shù)，至死亡細(xì)胞占總細(xì)胞量的60-80％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，通過臺盼藍(lán)染色法進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，將裂解產(chǎn)物通過過濾的方式，實(shí)現(xiàn)核質(zhì)成分分離；

優(yōu)選地，將裂解產(chǎn)物通過硅膠膜或超細(xì)玻璃纖維膜過濾。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取方法，其特征在于，將裂解產(chǎn)物加入含有超細(xì)玻璃纖維過濾柱的離心管中進(jìn)行過濾，實(shí)現(xiàn)核質(zhì)成分分離。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的提取方法，其特征在于，過濾后還包括清洗的步驟。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的提取方法，其特征在于，通過離心的方式進(jìn)行清洗；

優(yōu)選地，所述離心的條件為2500-3500g，離心8-12分鐘，優(yōu)選為3000g，離心10分鐘。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，分離后的細(xì)胞質(zhì)的RNA提取方法包括酚-氯仿法或離心柱法。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，分離后的細(xì)胞核的RNA提取方法包括先對細(xì)胞核進(jìn)行裂解處理，再采用酚-氯仿法或離心柱法提取細(xì)胞核RNA。

10.如權(quán)利要求1-9任一項所述的提取方法在功能基因組學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用。