[發(fā)明專利]一種食品中金黃色葡萄球菌定量檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010711558.6
• 申請日: 2020-07-22
• 公開（公告）號: CN111961704A
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設計）人: 桓麗莎;張攀;王曉磊;常夢媛;王艷曉;阮潤田
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州中檢科測試技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/14
• 分類號: C12Q1/14;C12Q1/06
• 代理公司: 鄭州立格知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41126
• 代理人: 胡錦雯

本發(fā)明公開了一種食品中金黃色葡萄球菌定量檢測方法，通過準備、制樣、培養(yǎng)和計數(shù)四個步驟，其中，制樣后，每個稀釋度樣品分別吸取1mL樣品勻液至培養(yǎng)皿中，然后每個培養(yǎng)皿中加入15?20mL添加了亞碲酸鉀卵黃增菌液的Baird?Parker培養(yǎng)基液，混勻，然后進行培養(yǎng)，培養(yǎng)后對可疑菌落進行計數(shù)并將可疑菌落通過血漿凝固酶試驗進行確證鑒定。本發(fā)明與現(xiàn)有的涂布法不同，能夠能夠快速、簡便、準確的測定食品中金黃色葡萄球菌。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種食品中金黃色葡萄球菌定量檢測方法。

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌是最常見的食物中毒病原菌之一，在自然界中隨處可見。因此，食品受其污染的機率很大。據(jù)美國疾病控制中心報告，金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒僅次于大腸桿菌，占第二位，占整個細菌性食物中毒的33%。金黃色葡萄球菌是引起臨床感染及手術(shù)切口感染的主要致病菌之一，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感，但抗生素的廣泛應用致使金黃色 葡萄球菌耐藥菌株的大量出現(xiàn)，使其造成的感染成為與乙型肝炎，艾滋病并列的世界三大感染頑疾。

目前定量檢測金黃色葡萄球菌的標準是傳統(tǒng)涂布法，該方法需吸取制備好的1mL樣品勻液以0.3mL、0.3mL和0.4mL接種量分別加入已制備好的三塊Baird-Parker培養(yǎng)基平板上，涂布均勻。此方法操作繁瑣，涂布所需時間較長，效率低，樣液在Baird-Park培養(yǎng)基平板上難吸收，涂布棒上殘留樣液多，針對1ml檢測結(jié)果準確性偏低。因此，迫切需要改進和提高食品中金黃色葡萄球菌檢測方法，提高金黃色葡萄球菌的檢測準確度，對食源性致病菌的檢測具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種食品中金黃色葡萄球菌定量檢測方法，能夠快速、簡便、準確的測定食品中金黃色葡萄球菌。

為達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種食品中金黃色葡萄球菌定量檢測方法，步驟如下：

步驟1：準備

1.1、按照生理鹽水的配制要求，稱取8.5g氯化鈉于1000mL三級水中，完全溶解后，高壓滅菌，冷卻，制備成生理鹽水備用；

1.2、按照Baird-Parker培養(yǎng)基基礎(chǔ)配制要求，稱取63.0g于950mL三級水中，加熱煮沸至完全溶解，高壓滅菌，46℃保溫，制備Baird-Parker培養(yǎng)基液，按比例取亞碲酸鉀卵黃增菌液加入到Baird-Parker培養(yǎng)基液中，混勻，備用；

步驟2：制樣

2.1、制樣，無菌稱取25g待測樣品置于盛有225mL如步驟1.1制備的生理鹽水的無菌均質(zhì)袋內(nèi)，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min-5min，制成1:10的樣品勻液；

2.2、稀釋，將樣品均液用如步驟1.1制備的生理鹽水10倍系列稀釋，選擇2-3個適宜的連續(xù)稀釋度樣品；

步驟3：培養(yǎng)

3.1、將步驟2.2選擇的每個稀釋度樣品分別吸取1mL樣品勻液至培養(yǎng)皿中，每個稀釋度樣品做2個，然后每個培養(yǎng)皿中加入15-20mL添加了亞碲酸鉀卵黃增菌液的Baird-Parker培養(yǎng)基液，混勻，得到培養(yǎng)平板。

3.2、待培養(yǎng)平板凝固后倒置放入培養(yǎng)箱中，恒溫36℃，培養(yǎng)48h；

步驟4：計數(shù)

4.1、計數(shù)可疑菌落；

4.2、將可疑菌落通過血漿凝固酶試驗進行確證鑒定。

進一步的，所述步驟1中的高壓滅菌使用型號為GI180TW立式自動壓力蒸汽滅菌器。