[發明專利]一種頭孢菌素C的發酵方法

在審

• 申請號: 202010705540.5
• 申請日: 2020-07-21
• 公開（公告）號: CN111876462A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 黨建寧;王強;寇韓濤;楊麗麗;趙佳美;何彬
• 申請（專利權）人: 伊犁川寧生物技術有限公司
• 主分類號: C12P35/06
• 分類號: C12P35/06;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

1.一種頭孢菌素C的發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備一級種子

取頂頭孢霉菌置于茄子瓶斜面，制備質量體積比為20-25％的菌懸液，按照1％-2％的接種量接種至一級種子培養基中，溫度為27-29℃的條件下培養50h，得到一級種子；

(2)制備二級種子

取步驟(1)所得一級種子，按照8％-10％的接種量接種于二級種子培養基中，在PH為6.5-7.4、溫度為27-29℃的條件下培養45-50h，得到二級種子；

(3)制備三級種子

取步驟(2)所得二級種子，按照8％-10％的接種量接種于三級種子培養基中，在PH為6.5-7.4、溫度為27-29℃的條件下培養45-50h，得到三級種子；

(4)發酵

取步驟(3)所得三級種子，按照25-33％的接種量接種至發酵培養基中培養，在發酵過程發酵培養40-100h后開始流加玉米漿，發酵130h后即得發酵液；

(5)將步驟(4)依次經過陶瓷膜過濾發酵液流量控制在15-30m³/h、納濾濃縮流量控制在60-80m³/h、樹脂吸附流量控制在50-80m³/h、解析分離純化流量控制在30-60m³/h，即得所述頭孢菌素C。

2.根據權利要求1所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述一級種子培養基的組成為：葡萄糖漿18-32g/L、大豆油8-15g/L、玉米漿50-100g/L、糊精7.5-15g/L、白砂糖18-36g/L、黃豆餅粉20-40g/L、花生餅粉20-40g/L、輕質碳酸鈣3.6-7.2g/L。

3.根據權利要求1所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述二級種子培養基的組成為：黃豆餅粉22-32g/L、白砂糖22-32g/L、糊精8-12g/L、花生餅粉22-32g/L、輕質碳酸鈣4-6g/L、玉米漿50-100g/L、葡萄糖漿18-32g/L、大豆油8-15g/L。

4.根據權利要求1所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述三級種子培養基的組成為：硫酸銨9-13g/L、無水硫酸鈣4-6g/L、谷朊粉9-13g/L、DL-蛋氨酸2-4g/L、玉米粉8-12g/L、糊精12-18g/L、花生餅粉12-16g/L、輕質碳酸鈣4-7g/L、玉米漿50-100g/L、葡萄糖漿14-18g/L、大豆油20-30g/L。

5.根據權利要求1所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述發酵培養基的組成為：硫酸銨10-26g/L、無水硫酸鈣10-13g/L、谷朊粉20-26g/L、DL-蛋氨酸5-6g/L、玉米粉15-20g/L、糊精17-22g/L、花生餅粉16-20g/L、輕質碳酸鈣5-8g/L、玉米漿50-100g/L、大豆油10-60g/L、棉籽油10-60g/L。

6.根據權利要求1所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述補入玉米漿的具體步驟為：

發酵40-80h使補加玉米漿流速為0.1-0.8L/m³·h；發酵80-100h時補加玉米漿流速為0.2-1.0L/m³·h。

7.根據權利要求6所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，所述玉米漿的干物質濃度為100-400g/L。

8.根據權利要求1所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述發酵培養的時間為120-140h。

9.根據權利要求1所述的一種用于發酵生產頭孢菌素C的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述發酵培養的時間為130h；發酵0-40h的溫度為28℃，發酵40-130h的溫度為24℃；發酵pH為5.6。