[發明專利]一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒

在審

• 申請號: 202010700571.1
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111812328A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 鄧鑫;趙曉芳
• 申請（專利權）人: 鄧鑫
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 南寧眾權專利代理事務所(普通合伙) 45133
• 代理人: 賀麗娟

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒，包括鼠抗人S100A11單克隆抗體、封閉液、工作液、抗體稀釋液、羊抗人二抗、DAB顯色液、濃度為0.01mol/L的檸檬酸鈉緩沖液、蘇木素染液、中性樹脂、70％乙醇、75％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、無水乙醇、二甲苯、PBS；本發明試劑盒通過檢測肝異常者的肝部異常部位與正常部位的S100A11蛋白表達水平，可以判斷肝異常者的S100A11蛋白表達水平差異，進而判斷待檢者患肝癌的風險。

【技術領域】

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒。

【背景技術】

肝癌可以大致分為2類，一類是原發性肝癌，還是一種是轉移性肝癌。原生性肝癌是的是，本身生長在肝臟表面的癌癥；而轉移性的肝癌，則因為其他組織和器官的癌細胞，慢慢轉移到肝臟處，從而慢慢生長成肝癌。一般來說，原發性的肝癌惡化到晚期的進程，要比轉移性肝癌時間久很多，大概要經過15年左右的時間，才會慢慢惡化成肝癌。

對于肝癌晚期的患者來說，當被發現晚期時，那就意味著體內的癌細胞已經大量擴散了，時間越久，惡化程度就越高，有的人甚至只有短短幾個月的時間可以活。所以，確診時間起著決定性的因素。但是目前沒有一種能快速且簡便的肝癌轉移早期測診斷試劑盒，使得肝癌的確診時間延后，導致患者得不到及時治療。

S100A11蛋白是鈣結合蛋白S100家族的成員，該家族共二十多個成員，與大多數S100蛋白一樣Ca2+結合會使其構象發生巨大的變化以便與其多種靶蛋白相互作用。在該家族中， Ca2+流是調節多種細胞進程的信號，包括凋亡、收縮、分化、基因表達和許多其他的生理過程。S100A1的靶蛋白包括Ca2+信號轉導中的蛋白、神經遞質釋放相關蛋白(突觸蛋白I、Ⅱ)、細胞骨架和細絲連接蛋白、轉錄因子及其調節因子、酶、以及其他Ca2+激活蛋白等。S100A11 在細胞中既有信號分子的作用又可以作為分泌蛋白起作用。

【發明內容】

鑒于以上問題，本發明提供了一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒。

本發明所要解決的技術問題采用以下技術方案實現：

一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒,包括鼠抗人S100A11單克隆抗體、封閉液、工作液、抗體稀釋液、羊抗人二抗、DAB顯色液、濃度為0.01mol/L的檸檬酸鈉緩沖液、蘇木素染液、中性樹脂、70％乙醇、75％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、無水乙醇、二甲苯、PBS；

所述的封閉液是用磷酸鹽緩沖液PBS作為溶劑配制的5％牛血清蛋白溶液；所述的工作液是用PBS溶液作為稀釋液將30％H₂O₂溶液稀釋為3％的H₂O₂溶液；所述的抗體稀釋液包括0.1％ (V/V)Tween-20的磷酸鹽、pH7.4的0.1MPBS溶液。

一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒使用方法，包括以下步驟：

1)取待檢測者肝部組織進行石蠟包埋切片，放置于60℃烘箱中15min，將所述石蠟切片脫蠟至水，得到所述脫蠟后的切片；

2)將所述脫蠟后的切片置于二甲苯中10min，更換二甲苯再浸泡10min，而后無水乙醇浸泡5min，95％乙醇浸泡5min，80％乙醇浸泡5min，75％乙醇浸泡5min，70％乙醇浸泡5min， PBS浸泡5min后更換PBS重復浸泡3次，得到初步處理后的切片；

3)將初步處理后的切片置于工作液室溫孵育20min，以消除內源性過氧化物酶的活性，得到滅酶處理后的切片；

4)用蒸餾水沖洗滅酶處理后的切片，而后PBS浸泡5min并更換PBS重復浸泡3次，得到清洗后切片；