[發明專利]一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒

在審

• 申請號: 202010700571.1
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111812328A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 鄧鑫;趙曉芳
• 申請（專利權）人: 鄧鑫
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 南寧眾權專利代理事務所(普通合伙) 45133
• 代理人: 賀麗娟

1.一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒，其特征在于，包括鼠抗人S100A11單克隆抗體、封閉液、工作液、抗體稀釋液、羊抗人二抗、DAB顯色液、濃度為0.01mol/L的檸檬酸鈉緩沖液、蘇木素染液、中性樹脂、70％乙醇、75％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、無水乙醇、二甲苯、PBS；

所述的封閉液是用磷酸鹽緩沖液PBS作為溶劑配制的5％牛血清蛋白溶液；所述的工作液是用PBS溶液作為稀釋液將30％H₂O₂溶液稀釋為3％的H₂O₂溶液；所述的抗體稀釋液包括0.1％(V/V)Tween-20的磷酸鹽、pH7.4的0.1MPBS溶液。

2.如權利要求1所述的一種肝癌轉移早期測診斷試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)取待檢測者肝部組織進行石蠟包埋切片，放置于60℃烘箱中15min，將所述石蠟切片脫蠟至水，得到所述脫蠟后的切片；

2)將所述脫蠟后的切片置于二甲苯中10min，更換二甲苯再浸泡10min，而后無水乙醇浸泡5min，95％乙醇浸泡5min，80％乙醇浸泡5min，75％乙醇浸泡5min，70％乙醇浸泡5min，PBS浸泡5min后更換PBS重復浸泡3次，得到初步處理后的切片；

3)將初步處理后的切片置于工作液室溫孵育20min，以消除內源性過氧化物酶的活性，得到滅酶處理后的切片；

4)用蒸餾水沖洗滅酶處理后的切片，而后PBS浸泡5min并更換PBS重復浸泡3次，得到清洗后切片；

5)將清洗后切片放入濃度為0.01mol/L的檸檬酸鈉緩沖液中，并置于微波爐內加熱，溫度為90-99℃，然后室溫放置11-15min，重復上述步驟3次，得到抗原修復后的切片；

6)將所述抗原修復后的切片放置于封閉液中，室溫孵育20～30min后，除去封閉液，向所述切片中滴加鼠抗人S100A11單克隆抗體，37℃孵育1～2小時，得到處理后的切片；

7)將處理后的切片置于PBS浸泡5min，并更換PBS重復浸泡3次；

8)向上述處理后的切片中滴加HRP標記的羊抗人二抗37℃孵育60min，得到二抗處理后的切片；

9)將所述二抗處理后的切片置于PBS浸泡5min，并更換PBS重復浸泡3次；

10)向上述處理后的切片中滴加適量工作液，37℃孵育60min；

11)將上述處理后的切片置于PBS浸泡5min，并更換PBS重復浸泡3次；

12)將上述處理后的切片置于DAB顯色液中室溫顯色，在顯微鏡下觀察切片的顯色過程，反應時間控制在5～10min，用蒸餾水沖洗切片，得到顯色后切片；

13)向所述顯色后切片上滴加蘇木素染液，輕度復染所述切片，而后用鹽酸酒精分化所述切片30s，蒸餾水沖洗所述切片10min，得到復染后的切片；

14)將所述復染后的切片，依次75％乙醇浸泡5min80％乙醇浸泡5min，95％乙醇浸泡5min并重復3次，100％乙醇浸泡5min并重復3次，二甲苯浸泡20min并重復3次，使用中性樹膠進行封片；

15)顯微鏡對封片進行拍照，使用DPController圖像采集系統采圖；采圖后，根據細胞染色強度及陽性面積給予免疫組化評分。