[發明專利]一種角蛋白酶高效異源表達的方法有效
| 申請號： | 202010698996.3 | 申請日： | 2018-08-16 |
| 公開（公告）號： | CN111662908B | 公開（公告）日： | 2022-08-16 |
| 發明（設計）人： | 龔勁松;史勁松;許正宏;蘇暢 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/75;C12N1/21;C12N9/54 |
| 代理公司： | 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 角蛋白 高效 表達 方法 | ||
1.一種啟動子，其特征在于，所述啟動子為角蛋白酶基因的啟動子，所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。
2.根據權利要求1所述的啟動子，其特征在于，所述角蛋白酶基因的核苷酸序列為如SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18或SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列，或與SEQ ID NO.17～19具有95％以上同源性的核苷酸序列。
3.一種含有權利要求1或2所述的啟動子的表達載體。
4.根據權利要求3所述的表達載體，其特征在于，所述載體為適于芽孢桿菌表達的載體。
5.一種表達角蛋白酶的重組菌，其特征在于，含有權利要求1所述的啟動子。
6.根據權利要求5所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌的宿主為枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、脆弱桿菌、克勞氏芽孢桿菌、嗜堿芽孢桿菌或蘇云金芽孢桿菌。
7.一種權利要求5或6所述的重組菌的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)以枯草芽孢桿菌基因組為模板，擴增啟動子序列，并進行突變，得到核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的啟動子序列；
(2)將步驟(1)的啟動子片段回收后構建到攜帶角蛋白酶基因的質粒中得到重組質粒；
(3)將步驟(2)的重組質粒轉化到宿主菌中，得到重組菌。
8.一種權利要求5或6所述的重組菌生產角蛋白酶的方法，其特征在于，將所述重組菌以1～10％接種量接種到發酵罐中，以發酵溫度28～40℃、轉速100～1000rpm、通氣量為0.5～3vvm、pH為5.5～8.5的條件下發酵生產，得到角蛋白酶。
9.一種權利要求1或2所述的啟動子在促進角蛋白酶表達中的應用。
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